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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 纯化后蛋白的SDS-PAGE
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

[交流] 纯化后蛋白的SDS-PAGE

各位看看我的蛋白纯化后电泳图，是一个膜蛋白，纯化的倒是还可以就是条带有点模糊，像是拖尾一样，左边的两条带，右边的那条还是可以的，只不过是两次纯化的样品，感觉条件啥都一样啊，为什么会这样，又遇到过类似的情况的吗

SDS-PAGE
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1楼 2012-04-21 12:02:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biomater

银虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
所谓的纯化就是超滤离心？那不妨多做几次，充分打散后，在离心。。。。
左边很明显没有除掉杂蛋白。

条带有些太靠下了，试试胶的浓度+2%。。。。
多次纯化浓度会下降，你上样的时候，用5x的loadingbuffer，同时增大上样量。右边的感觉也不是很清晰。
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7楼2012-04-23 23:42:14
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976: 金币+1, 谢谢你一直帮助我，我再调整一下浓度试一试 2012-04-22 15:01:12
SDS-PAGE电泳拖尾可能是杂蛋白或者样品浓度较大。解决方法：先对于样品进行离心或超滤，加上蒸馏水稀释，再上样电泳；如果效果还是不佳，建议做分子筛层析纯化后对于样品进行离心或超滤，加上蒸馏水稀释，再上样电泳。膜蛋白纯化可采用疏水层析。
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2楼2012-04-21 22:13:27
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
昨天用手机看的图不是很清楚，现在看来是不是最右边条带是超滤纯化的呢？如果是的话，它条带很浅的原因应该是你在超滤完成的时候取样的时候是不是没有多用枪打几下？因为超滤离心过后蛋白容易吸附到超滤膜上，如果不多打两下的话蛋白是不会取下来的。
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6楼2012-04-23 09:22:44
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BioChemCom

银虫 (小有名气)
★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976: 金币+1, 我也不知道 可能是溴酚蓝吧 2012-04-22 15:00:25
说实在话的，没有看懂你的图。左边两个泳道都有两条带，右边那条泳道只有一条带。这是怎么回事呢？
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3楼2012-04-22 11:04:11
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976: 金币+1, 可能是浓缩的程度不一样，导致两次样品浓度不一样，下次我离心试一试吧 2012-04-22 14:59:44
左边条带拖尾应该是溶质不纯的原因啦 离心一下就好 而且右边条带似乎浓度不高的样子 有降解吗？
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4楼2012-04-22 13:25:05
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★ ★
丫头7976: 金币+2, 是啊 我用的millipore家的超滤浓缩管，一是为了浓缩，二是为了除盐，咪唑，更换bufffuer，有时会损失很多，哎 膜蛋白给我带来了很多困扰。怎么办呢 这是我的蛋白降解了还是怎么的 2012-04-23 08:40:42
你是进行了超滤浓缩吗？还是聚乙二醇？浓缩条件是会影响电泳结果的呢。
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5楼2012-04-22 23:42:41
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sl35537417

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
俺也没看懂   上下两条带 倒像两块胶  还有那条带是你的 目的蛋白
也没有marker对照 不知道是你的胶的问题还是蛋白有降解
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8楼2012-04-24 04:35:33
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sl35537417 at 2012-04-24 04:35:33:
俺也没看懂   上下两条带 倒像两块胶  还有那条带是你的 目的蛋白
也没有marker对照 不知道是你的胶的问题还是蛋白有降解

上了marker 没有跑出来，我再好好做一次，有可能是蛋白不纯
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9楼2012-04-24 09:02:31
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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
电压，楼主跑的时候适当调低电压。或者上样之前先离心，去上清跑
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10楼2012-05-17 18:53:13
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chengjg

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把分离胶换成15%的 染色液配个新的 效果好一点
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11楼2012-05-17 19:51:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
连分子量标记都没有跑出来，说明实验出问题，做胶或者电泳，这样的结果是绝对不可信的，不必浪费时间分析这次的实验结果，只能重跑，一直到分子量标记的每一个条带都清晰可辨才可以分析。
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丫头7976
12楼2012-05-17 20:19:46
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-05-17 20:19:46:
连分子量标记都没有跑出来，说明实验出问题，做胶或者电泳，这样的结果是绝对不可信的，不必浪费时间分析这次的实验结果，只能重跑，一直到分子量标记的每一个条带都清晰可辨才可以分析。

嗯 我找到原因了
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13楼2012-05-20 08:38:54
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 丫头7976 at 2012-05-20 08:38:54:
嗯 我找到原因了

原因是什么
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14楼2012-05-20 18:55:52
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落明逐暗

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主拖尾的原因是什么呢？我最近的电泳也是拖尾严重，想求教一下。
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15楼2012-05-23 10:12:49
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-05-20 18:55:52:
原因是什么

胶没制好
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16楼2012-05-24 08:09:21
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丫头7976

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 落明逐暗 at 2012-05-23 10:12:49:
楼主拖尾的原因是什么呢？我最近的电泳也是拖尾严重，想求教一下。

胶没制好，或者detergent有点多了
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17楼2012-05-24 08:09:54
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