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多重PCR引物的设计思路流程（融合基因）！！新手入门中。。各种问题。。
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融合基因的四重PCR引物的设计，有什么常用的思路吗？如何入手？ 用oligo来设计。是先需要把四个融合基因来多序列比对找出相似度低的区域吗？ 我用vector NTI多序列比对，但是不知道如何从比对结果中找出相似度低的区段。 之后想加入探针，所以在设计引物时应该为探针留下多长的序列呢？探针应该放在融合点之前吗？那么在融合点之后需要留多少bp呢（想要检测融合点的基因，主要想扩增融合点的基因）？ 总是有很多的二聚体，如何从对引物的条件设置上来减轻工作量呢？ 问题太多了。。如果有经验的前辈，麻烦指点一二~选择性回答也行~急~ 谢谢~~ |
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