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可帅儿

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[交流] 扩增曲线不平滑是怎么回事？

我又来了。。。
今天又做了一批荧光PCR，最后的结果是大致的曲线走向都对的，就是有个问题曲线不够平滑。图在下面。以前做了几次也有这个问题呢~请问这会是什么原因？
P.S.我用的是ABI7500做的，想同时做出扩增曲线和溶解曲线，请问有木有熟悉仪器的大虾，应该怎么setup才行呢？貌似实验type只能是一种。。。

配工作液还不太熟练，我怕配错；于是想一管一管加，这样至少不会有差错。

这是4个重复的反应，用的是50ul体系

这也是4个重复的，但是100ul体系，貌似效果比50 的好

[ Last edited by 可帅儿 on 2012-4-19 at 13:42 ]

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1楼 2012-04-17 15:30:17

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首先ABI的机器推荐你用TAKARA公司的Mix，我们做过对比试验，这个mix可以说是目前世界上最好的mix之一，使用20ul反应体系即可。还有7500机器延伸时间最好不要低于30s，因为机器在这一步收集荧光信号，时间太短的话你自己应该也能想明白为什么不好。强烈要求你把反应体系中共同的成分配制成mix，然后统一分装到8连管或者96孔板内，这样可以最大限度的减少实验误差。最后一点，上机前一定要短暂离心。

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55楼2013-07-09 14:44:27