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syn1985

木虫 (正式写手)

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[交流] 链霉菌基因敲除怪现象

我做链霉菌in frame deletion做了好几个月了这月初用菌落PCR方法检测到了突变株真的好开心然后就发酵 LCMS检测发现产物还在我就觉得很郁闷然后我重新分了单克隆取单克隆的孢子做了菌落PCR PCR检测发现扩增结果比野生小大小和预期的也一样测序结果也是对的可是用目标基因的特异性引物扩增竟然也能扩出目的大小条带这是怎么回事这是我检测手段有问题还是这个菌里面有另一个拷贝啊

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1楼 2012-04-16 14:33:52

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syn1985

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引用回帖:

4楼: Originally posted by zct2008 at 2012-04-16 16:56:27:
用目标基因的特异性引物扩增也能扩出目的大小条带，有两种可能：一种可能是非特异性扩增，这个应该好排除，可以通过测序等。另一种可能就是这一个基因在你的这个菌里面有另一个拷贝，当然前提是你要确定你的这个菌 ...

谢谢我这菌用孢子悬液涂得平板确定是纯的无杂菌我今天将测序结果送去测序了等后天结果出来了再看吧