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baby1_9253344

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[求助] 重组质粒丢失一个碱基是否影响表达

如题，欲将外源基因插入PET30a质粒的多酶切位点，表达蛋白。测序后发现在rbs前面的基因处少了个碱基A，别的地方都正常。不知道这样是否会造成错位，影响蛋白表达？
如图，红圈标出位置本应是AAA，但测序结果是AA....前面测序的图挺丑的，不过后面的峰还是挺分明的（见附件），新手，不懂怎么看测序图。求高手解答~~

测序图[ Last edited by baby1_9253344 on 2012-4-10 at 20:13 ]

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附件 1 : 04081171(5)T7_G10.ab1

2012-04-10 20:12:36, 257.25 K

1楼 2012-04-10 19:37:23

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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

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"ATG上游的序列不涉及阅读框，所以在5’端HindIII位点到ATG的序列不会带来移码突变。但是在大肠杆菌中核糖体受一段富含嘌呤的SD序列引导从而识别AUG起始密码，核糖体结合位点RBS和起始密码AUG之间的距离以及碱基的组成对翻译的效率有显著影响，在设计的时候要注意。一般建议在ATG上游加入保守序列5'-UAAGGAGGUGA-3'（其中AGGAGG是RBS保守序列），并根据预实验结果调节，如果载体本身已经带了RBS序列就可以不加。同时在ATG与RBS之间要有一定的空间序列（约小于10个碱基），可以采用靶基因ATG上游的序列。"这是在网上搜到的...

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6楼2012-04-11 08:59:18

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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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telomerase: 金币+2, 辛苦辛苦 2012-04-10 20:56:29
baby1_9253344: 金币+2 2012-04-11 08:22:49
baby1_9253344: 金币+2, 谢谢回复~ 2012-04-11 09:10:21

测序峰图不是很好，可能是测序错误。

如果是缺掉一个碱基，会造成移码突变，只能重做。

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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。