应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
191/2返回列表12下一页
查看: 4715  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

幸福常在

铁虫 (初入文坛)

[求助] 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦 已有1人参与

我的跨膜蛋白，具七次跨膜结构，用过PET28a载体分别转过BL21（DE3）和具有稀有密码子的transset（DE3)宿主,同时做过两遍的时间诱导（2h，4h，6h）和浓度诱导（0.2,0.6,1.0,1.4的IPTG），同时做是其他基因完美诱导出来了，就是这个具有跨膜结构的一直SDS-PAGE无条带，现在转换PET32a载体转BL21（de3），但是一直连接不上，目前原核表达已经耗时近2个月共8次了，甚为纠结，含泪求各位战友指教！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-09 09:45:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

beimi

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-21 22:18:40
我也是做这个的，跨莫蛋白，我是做翻译后修饰，你的iptg浓度太高了，我最多才用0.05，用哦
0。01也行，低温，段时间，我做了三个月了，快昨晚了，祝好听

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(4人) 回复此楼
8楼2013-01-18 07:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄油411

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
幸福常在: 回帖置顶 2012-04-11 19:58:48
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-12 13:41:03
跨膜蛋白的原核表达一般都不怎么靠谱的，还要看运气的。建议将跨膜区逐个去掉后再表达。不管表达不表达，克隆肯定能连上的，再检查下是不是哪步出现错误了。你表达的7跨膜蛋白是不是G蛋白受体系列的啊
赞一下(1人) 回复此楼
专心做抗体
2楼2012-04-09 16:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

幸福常在

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄油411 at 2012-04-09 16:22:36:
跨膜蛋白的原核表达一般都不怎么靠谱的，还要看运气的。建议将跨膜区逐个去掉后再表达。不管表达不表达，克隆肯定能连上的，再检查下是不是哪步出现错误了。你表达的7跨膜蛋白是不是G蛋白受体系列的啊

恩，是的，是昆虫or83b气味受体，G蛋白偶联受体，几乎整个蛋白都是跨膜，如果要去掉跨膜结构的话，估计整个蛋白就都是断裂的了，求指教
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-11 19:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄油411

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 幸福常在 at 2012-04-11 19:58:09:
恩，是的，是昆虫or83b气味受体，G蛋白偶联受体，几乎整个蛋白都是跨膜，如果要去掉跨膜结构的话，估计整个蛋白就都是断裂的了，求指教

没有啥太好的办法，先去掉1-2个跨膜区，要是能表达出来就继续去。不过要看你这个蛋白的用途了
赞一下 回复此楼
专心做抗体
4楼2012-04-12 09:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄-鸣

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-11 15:54:59
如果是用pcr产物做连接，有可能是酶切位点保护碱基太短，酶切效率太低。楼主做的啥虫？我在做一个蛾子的or83b表达，32a也还没表达出来。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-11 09:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你可以选用一些融合标签进行融合表达。即便不表达但是应该能连接上去的
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-08 14:03:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangna0320

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-21 22:18:33
楼主，后来你怎么解决的呢，我现在也在做膜蛋白的表达，做原核表达也是不能表达出来啊，用PET32a，但是转BL21中，平板不长，不知道为什么，后来好不容易长了几个菌，但是做时表达，没有表达的条带，很想知道你后来怎么做的？
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-17 14:15:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莲绽夜阑

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by beimi at 2013-01-18 07:19:40
我也是做这个的，跨莫蛋白，我是做翻译后修饰，你的iptg浓度太高了，我最多才用0.05，用哦
0。01也行，低温，段时间，我做了三个月了，快昨晚了，祝好听

我刚开始做蛋白表达，也是膜蛋白，我做膜蛋白胞外部分原核表达，蛋白比较大，70KD,想问问你表达的蛋白多大？用的什么载体和细胞？像我这种情况能不能可能表达出可溶蛋白？
新手，求指教！
赞一下 回复此楼
对于一切一切的黑暗，至少不要绝望
9楼2013-04-17 09:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九戒不是戒

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by beimi at 2013-01-18 07:19:40
我也是做这个的，跨莫蛋白，我是做翻译后修饰，你的iptg浓度太高了，我最多才用0.05，用哦
0。01也行，低温，段时间，我做了三个月了，快昨晚了，祝好听

我最近也在做G蛋白偶联受体的原核表达，1个月了，一点结果都木有，我用的是载体是PET-32a,表达菌rosseta，IPTG分别0.4,0.6,0.8mM，时间10小时，15小时，温度分别20°，34°。培养基TB，分别试了加百分之2的葡萄糖和不加葡萄糖。    想问下你是怎么做的，求助啊
赞一下 回复此楼
10楼2013-08-22 03:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 幸福常在 的主题更新
191/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +6 墨墨漠 2026-03-18 6/300 2026-03-20 00:02 by 23Postgrad
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +5 Doleres 2026-03-19 5/250 2026-03-19 20:14 by 制度的
[考研] 271材料工程求调剂 +6 .6lL 2026-03-18 6/300 2026-03-19 15:41 by haoshis
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 10/500 2026-03-19 15:08 by 阳阳哇塞
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[教师之家] 焦虑 +9 水冰月月野兔 2026-03-13 13/650 2026-03-19 09:50 by otani
[考研] 材料专硕英一数二306 +5 z1z2z3879 2026-03-18 5/250 2026-03-19 07:43 by BruceLiu320
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭