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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
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beimi

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 九戒不是戒 at 2013-08-22 03:51:32
我最近也在做G蛋白偶联受体的原核表达，1个月了，一点结果都木有，我用的是载体是PET-32a,表达菌rosseta，IPTG分别0.4,0.6,0.8mM，时间10小时，15小时，温度分别20°，34°。培养基TB，分别试了加百分之2的葡萄糖和 ...

我做了半年，最后换了tag，用mbp表达的，还不错，我用的bl21，另一个据说很好的，我的表达不好，可能不同的蛋白不一样吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2013-08-22 05:19:12
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可否考虑用真核表达载体转进相应的昆虫细胞进行表达，真核表达蛋白还具有活性，对于后续的验证也是极大的方便。
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成功，就是成为你想成为的人
12楼2013-08-22 08:16:00
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匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
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13楼2014-08-27 16:59:39
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beimi

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zq191236086 at 2014-08-27 16:59:39
您好，请问您的膜蛋白表达iptg的浓度时0.05mM吗？...

是的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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14楼2014-08-28 21:03:49
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yjq151632

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by beimi at 2013-01-18 07:19:40
我也是做这个的，跨莫蛋白，我是做翻译后修饰，你的iptg浓度太高了，我最多才用0.05，用哦
0。01也行，低温，段时间，我做了三个月了，快昨晚了，祝好听

你好，想请教一下，低温是多少度？多长时间？
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15楼2015-01-29 20:50:00
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jjllxx

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by yjq151632 at 2015-01-29 20:50:00
你好，想请教一下，低温是多少度？多长时间？...

最后出来了么，我现在做的是5次跨膜的，不知道楼主最后怎么表达出来的
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16楼2015-05-07 17:46:10
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1991jane

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 九戒不是戒 at 2013-08-22 03:51:32
我最近也在做G蛋白偶联受体的原核表达，1个月了，一点结果都木有，我用的是载体是PET-32a,表达菌rosseta，IPTG分别0.4,0.6,0.8mM，时间10小时，15小时，温度分别20°，34°。培养基TB，分别试了加百分之2的葡萄糖和 ...

最后做出来了吗？请问是什么条件？
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17楼2016-03-18 11:19:15
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Tiandybest

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by yjq151632 at 2015-01-29 20:50:00
你好，想请教一下，低温是多少度？多长时间？...

请问您的条件是什么，我现在在做6次跨膜蛋白的表达，跪求

发自小木虫Android客户端
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18楼2017-09-07 00:51:32
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shen134

禁虫
本帖内容被屏蔽
19楼2020-09-13 13:15:22
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