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幸福常在

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦已有1人参与

我的跨膜蛋白，具七次跨膜结构，用过PET28a载体分别转过BL21（DE3）和具有稀有密码子的transset（DE3)宿主,同时做过两遍的时间诱导（2h，4h，6h）和浓度诱导（0.2,0.6,1.0,1.4的IPTG），同时做是其他基因完美诱导出来了，就是这个具有跨膜结构的一直SDS-PAGE无条带，现在转换PET32a载体转BL21（de3），但是一直连接不上，目前原核表达已经耗时近2个月共8次了，甚为纠结，含泪求各位战友指教！！！

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1楼 2012-04-09 09:45:31

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1991jane

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 九戒不是戒 at 2013-08-22 03:51:32
我最近也在做G蛋白偶联受体的原核表达，1个月了，一点结果都木有，我用的是载体是PET-32a,表达菌rosseta，IPTG分别0.4,0.6,0.8mM，时间10小时，15小时，温度分别20°，34°。培养基TB，分别试了加百分之2的葡萄糖和 ...

最后做出来了吗？请问是什么条件？

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