24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

幸福常在

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 23
帖子: 15
在线: 21.5小时
虫号: 1227805
注册: 2011-03-10
性别: GG
专业: 农业昆虫学

[求助] 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦已有1人参与

我的跨膜蛋白，具七次跨膜结构，用过PET28a载体分别转过BL21（DE3）和具有稀有密码子的transset（DE3)宿主,同时做过两遍的时间诱导（2h，4h，6h）和浓度诱导（0.2,0.6,1.0,1.4的IPTG），同时做是其他基因完美诱导出来了，就是这个具有跨膜结构的一直SDS-PAGE无条带，现在转换PET32a载体转BL21（de3），但是一直连接不上，目前原核表达已经耗时近2个月共8次了，甚为纠结，含泪求各位战友指教！！！

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有293人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

[求助]哪位好人学校可以使用微谱数据库，帮我检索几个化合物的母核。谢谢！已经有4人回复
【资料】studier的自动诱导系统---原核诱导表达蛋白，无需IPTG 已经有125人回复
蛋白表达偏大已经有8人回复
投了国内某一中文核心期刊，外审基本通过，这种情况录用概率大不大？已经有12人回复
大家看看我做出来的东西是铝溶胶吗已经有22人回复
严重怀疑南京大学考博英语成绩有误！！！！！有成绩复核的朋友一起啊！！！已经有93人回复
内容为“导电聚苯胺电极的制备和应用”的中文文章，求推荐核心期刊已经有11人回复
金纳米二氧化硅核的制备相关问题已经有4人回复
请教高手指点迷津－固体磷核磁表征固体酸酸强度已经有5人回复
膜蛋白表达问题已经有15人回复
这种跨膜蛋白的图用什么软件能画？已经有11人回复
PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白已经有30人回复
【求助/交流】求高手指点！关于用C43（DE3)表达膜蛋白已经有4人回复
【求助/交流】做过膜蛋白表达的看过来已经有12人回复

1楼2012-04-09 09:45:31

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

幸福常在

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 23
帖子: 15
在线: 21.5小时
虫号: 1227805
注册: 2011-03-10
性别: GG
专业: 农业昆虫学

引用回帖:

2楼: Originally posted by 黄油411 at 2012-04-09 16:22:36:
跨膜蛋白的原核表达一般都不怎么靠谱的，还要看运气的。建议将跨膜区逐个去掉后再表达。不管表达不表达，克隆肯定能连上的，再检查下是不是哪步出现错误了。你表达的7跨膜蛋白是不是G蛋白受体系列的啊

恩，是的，是昆虫or83b气味受体，G蛋白偶联受体，几乎整个蛋白都是跨膜，如果要去掉跨膜结构的话，估计整个蛋白就都是断裂的了，求指教