| 查看: 5740 | 回复: 7 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
琼脂糖电泳没有条带，但是DNA浓度很高，1000+ng/ul maker有条带
|
||||
| Sample Text本人最近几次PCR产物跑胶总是没条带，操作和以往经验一样，用1%的TBE琼脂糖凝胶电泳，跑25分钟左右，但是一直都没有条带，maker可以正常跑出，目的片段是750bp左右的片段，换了人操作，结果也是一样，但是测PCR产物DNA浓度的时候又有约1000+ng/ul，这是什么情况啊，求各位高人分析指点，小弟不甚感激！！！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生物 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有105人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关电泳实验的问题
已经有6人回复
- 急求RT-PCR电泳图分析
已经有22人回复
- 求助，为什么SSR扩增产物琼脂糖跑出的条带会比maker最大分子量还要大呢？？
已经有7人回复
- 蛋白电泳，第二向，溴酚蓝不是一条线，有两个向上的凸起，是什么原因造成的啊
已经有5人回复
- 环境样品地下水中细菌总DNA的提取方法
已经有23人回复
- 小片段DNA电泳看不见条带
已经有9人回复
- 琼脂糖凝胶电泳，跑的条带有点难看
已经有15人回复
- 质粒提取琼脂糖电泳的3个条带，到底每条是什么？
已经有15人回复
- 提取RNA时，为何会有DNA条带，并且有且只有一条带？
已经有9人回复
- 提基因组DNA电泳有三条带是怎么回事啊?
已经有6人回复
- 【求助/交流】急！！！琼脂糖凝胶电泳的问题，跑不出条带了！！
已经有8人回复
- 【求助/交流】蛋白Maker的条带问题
已经有3人回复
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
|
针对你这种情况，我也明白你为什么扩不出来了，PCR是有模板量限制的，这很多人知道但不明白为什么。 举个例子来说，为什么PCR到40多循环进入平台期后就不再有高扩增效率，这并非是酶不强劲，现代重组工业生产的酶即使是在PCR循环后期仍旧活力很高。 同样这也不是组份消耗过多的问题，如果你加入两倍量dNTP、引物，到40循环左右仍旧会进入平台期，扩增效率下降。 问题在哪里，是聚合酶有倾向于结合完整双链的特点，如果退火条件稍差，模板-引物结合的趋势仍会逊于模板模板相结合，造成其对聚合酶的竞争效应，所以初始模板过多和循环一定程度这两种情况可以说是等同的。 所以，若你扩不出来东西，首先尝试调整条件，引物一般只要不是很夸张，一般PCR的应用是没有什么特异特异性的可言的  |
6楼2012-04-10 21:02:58
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！有理有据！ 2012-04-08 16:45:00
h411470316: 金币+9, ★★★★★最佳答案 2012-04-10 19:54:23
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！有理有据！ 2012-04-08 16:45:00
h411470316: 金币+9, ★★★★★最佳答案 2012-04-10 19:54:23
|
嗯..................... 说实话，你这个操作是个失误哦，你测PCR产物是通过分光光度法测定的吗？如果是，绝对不能这么操作的啊，原因有以下： 1. 你如何调Blank，PCR体系混杂，难道你要再配一管没模板的PCR混合液去调Blank的吗？ 2. PCR都是成指数（理想状态）扩增，数十个循环的正常PCR产物去测光密度，可能都会暴表了。 3. 分光光度法又没法分辨你的产物和其他类型核酸的，所以你的引物在里边也会正常读出来的 所以确定有没有PCR产物只能是电泳或荧光定量的方法来检验 祝实验顺利，若有说错请高手指正哦 |
2楼2012-04-07 23:36:00
wtyyyyy1988
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 6399
- 散金: 490
- 红花: 2
- 帖子: 697
- 在线: 153.6小时
- 虫号: 1196990
- 注册: 2011-01-27
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
3楼2012-04-08 00:08:57
4楼2012-04-10 19:57:12
40