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93447048

新虫 (小有名气)

[求助] 求助,real-time PCR 标准样品和部分待测样品,没有CT值 已有1人参与

刚做real-time PCR,遇见了一个大问题,待高手解答,先谢谢了!

我的标准样品和待测样品中的8个,都没有CT值
probe用的是TaqMan

PCR 反应溶液组分:
DNA 2 uL, 50-150 ng, 260/280 都在1.8-2.1之间,
probe: 2 pmol
primers: 4 pmol
master mix: 10 ul
总共: 20 uL

plasmid DNA作为标准DNA模板,待测DNA来于活性污泥,目标DNA是RNA

循环了40次,标准样品都没CT值,10个待测样品,只有两个有CT值

该实验重复了一点,结果类似

我用同样的引物,用没稀释的标准DNA和待测DNA,做个常规PCR,跑胶结果显示目标DNA是扩增了的。
real-time PCR 仪器是:Stratagene Mx3000

可能原因是?
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93447048

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-07 08:52:38:
你是不是在选择荧光的时候出了问题

我选择的FAM,ROX作为参照
3楼2012-04-07 08:59:36
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是不是在选择荧光的时候出了问题
2楼2012-04-07 08:52:38
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786545816

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也有同样的问题,你的mix用的是什么mix啊
4楼2014-09-21 16:38:58
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