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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，real-time PCR 标准样品和部分待测样品，没有CT值
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93447048

新虫 (小有名气)

[求助] 求助，real-time PCR 标准样品和部分待测样品，没有CT值 已有1人参与

刚做real-time PCR，遇见了一个大问题，待高手解答，先谢谢了！

我的标准样品和待测样品中的8个，都没有CT值
probe用的是TaqMan

PCR 反应溶液组分：
DNA 2 uL, 50-150 ng， 260/280 都在1.8-2.1之间，
probe: 2 pmol
primers: 4 pmol
master mix: 10 ul
总共： 20 uL

plasmid DNA作为标准DNA模板，待测DNA来于活性污泥，目标DNA是RNA

循环了40次，标准样品都没CT值，10个待测样品，只有两个有CT值

该实验重复了一点，结果类似

我用同样的引物，用没稀释的标准DNA和待测DNA，做个常规PCR，跑胶结果显示目标DNA是扩增了的。
real-time PCR 仪器是：Stratagene Mx3000

可能原因是？
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1楼 2012-04-07 06:53:00
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是不是在选择荧光的时候出了问题
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2楼2012-04-07 08:52:38
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93447048

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-07 08:52:38:
你是不是在选择荧光的时候出了问题

我选择的FAM，ROX作为参照
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-07 08:59:36
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786545816

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也有同样的问题，你的mix用的是什么mix啊
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4楼2014-09-21 16:38:58
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