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孙金钥

银虫 (正式写手)

[求助] 蛋白沉淀的奇异事件

求助各位大侠:我现在用乙腈沉淀蛋白之后,上清液有点黄,大家有遇到过这种情况吗?另外我再加入了等量的氯仿之后,会有少量沉淀出现还有分层,那分层的物质是油脂还是氯仿?谢过大家了!在其他地方看过说氯仿和乙腈混溶的
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cj22xmc

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-04-02 11:04:45
氯仿和乙腈是互溶的,和油脂也相溶,怎么分层?
mc
2楼2012-04-02 08:45:45
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-04-02 11:04:51
用乙腈沉淀蛋白最少要3倍体积的乙腈,否则沉淀不完全的,不知道楼主用的几倍量。能固相萃取,不液液萃取,能液液萃取,不沉淀蛋白,一般都选择液液萃取,固相萃取成本太高,沉淀蛋白会比较伤色谱柱。
3楼2012-04-02 09:58:38
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白水6177

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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孙金钥: 金币+5, ★★★很有帮助, 大哥很强啊! 2012-04-05 07:35:23
孙金钥: 回帖置顶 2012-04-05 07:35:28
现在随着仪器设备的不断精进,对于样品前处理的要求越来越低,越来越不需要顾虑仪器会有检测不到的问题。但是新的思路是,如何能将各种误差降低到最小,将检测值的准确度提高。我同意用已经沉淀蛋白,真正做到蛋白沉淀完全干净没必要,乙腈的沉淀效率还是很高的,一般不少于1.5倍体积,处理后的就可以进质谱了。现在色谱柱和保护柱柱心越来越算做耗材了,节约时间,不对质谱造成多大影响就可以了。
乙腈和水是相混溶的,氯仿和水是分层的,加入氯仿明显将水层会分离出一部分来。至于发现有黄的情况,跟采集的样品有关,无需多虑。
4楼2012-04-03 11:50:47
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孙金钥

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cj22xmc at 2012-04-02 08:45:45:
氯仿和乙腈是互溶的,和油脂也相溶,怎么分层?

是啊,我单独把乙腈和氯仿混匀也不分层,但是如果在血浆中就有油状分层,奇怪啊!
5楼2012-04-05 07:34:17
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孙金钥

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 白水6177 at 2012-04-03 11:50:47:
现在随着仪器设备的不断精进,对于样品前处理的要求越来越低,越来越不需要顾虑仪器会有检测不到的问题。但是新的思路是,如何能将各种误差降低到最小,将检测值的准确度提高。我同意用已经沉淀蛋白,真正做到蛋白 ...

解决了心头的疑惑啊,谢谢啦!
6楼2012-04-05 07:36:04
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孙金钥

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-04-02 09:58:38:
用乙腈沉淀蛋白最少要3倍体积的乙腈,否则沉淀不完全的,不知道楼主用的几倍量。能固相萃取,不液液萃取,能液液萃取,不沉淀蛋白,一般都选择液液萃取,固相萃取成本太高,沉淀蛋白会比较伤色谱柱。

谢谢啦,问题已经弄明白啦!
7楼2012-04-05 07:37:16
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天一生水muse

新虫 (初入文坛)

请问如果蛋白沉淀不完全,会对色谱峰有什么影响吗?
8楼2013-01-07 21:46:52
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天一生水muse

新虫 (初入文坛)

我用1:1的乙腈沉淀血浆,发现得到的色谱峰与进水煎液得到的色谱峰的保留时间有差别,这是因为蛋白沉淀不完全吗?
9楼2013-01-07 21:48:16
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