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毕赤酵母基因重组时遇到困难了
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[交流]
毕赤酵母基因重组时遇到困难了
目的基因大概800bp左右，同源臂设置了大概300bp，一直做电转化，两个多月了，长了N多假阳性，怎么办呢，急死了~~~~~~~~~各位对于做基因敲除有啥好的建议不！
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2012-03-27 16:47:35
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Petter_JDW
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2012-03-28 08:13:59
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~
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2楼
2012-03-27 20:39:57
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同意楼上，我协助学姐做的基因敲除，也存在这个问题来着，然后经老师指点，解决方法与楼上类似。
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2012-03-27 23:15:56
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Petter_JDW
at 2012-03-27 20:39:57:
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~
但是目的基因前后的非编码区太短，我看来一下，最多同源臂只能是500bp
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4楼
2012-03-28 12:10:18
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Petter_JDW
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4楼
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Originally posted by
香蕉宝宝
at 2012-03-28 12:10:18:
但是目的基因前后的非编码区太短，我看来一下，最多同源臂只能是500bp
那就只有尽量设计长一些~~祝顺利
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5楼
2012-03-28 12:41:11
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2012-03-30 08:32:13
这个太正常了，一步法就是很多假阳性，多筛选多做，迟早会有对的，大量的重复工作
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6楼
2012-03-29 23:15:39
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hyacinth326
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我也在做基因敲除，上下游同源臂各1000，还是做细菌的，到目前为止，转了三次得到的基本都是假阳性~~~
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7楼
2012-03-30 13:17:57
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王子扶苏
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我做的同源臂分别是700和500，用醋酸锂做的化学转化，两次就转进去了。。。。不过受体是单倍体
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8楼
2012-04-01 10:31:27
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2012-04-05 17:08:33
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mm3545
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼
:
Originally posted by
Petter_JDW
at 2012-03-27 20:39:57
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~
同学 你们做丝状真菌基因敲除是用的什么方法啊，电转化还是原生质体转化啊，求方法，教教俺啊
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10楼
2013-04-16 08:58:45
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