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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 毕赤酵母基因重组时遇到困难了
汕头大学海洋科学接受调剂
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香蕉宝宝

木虫 (小有名气)

[交流] 毕赤酵母基因重组时遇到困难了

目的基因大概800bp左右，同源臂设置了大概300bp，一直做电转化，两个多月了，长了N多假阳性，怎么办呢，急死了~~~~~~~~~各位对于做基因敲除有啥好的建议不！
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1楼 2012-03-27 16:47:35
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Petter_JDW

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-28 08:13:59
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~
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2楼2012-03-27 20:39:57
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在长在的man

铁杆木虫 (正式写手)
★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
同意楼上，我协助学姐做的基因敲除，也存在这个问题来着，然后经老师指点，解决方法与楼上类似。
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3楼2012-03-27 23:15:56
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香蕉宝宝

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-27 20:39:57:
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~

但是目的基因前后的非编码区太短，我看来一下，最多同源臂只能是500bp
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4楼2012-03-28 12:10:18
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Petter_JDW

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 香蕉宝宝 at 2012-03-28 12:10:18:
但是目的基因前后的非编码区太短，我看来一下，最多同源臂只能是500bp

那就只有尽量设计长一些~~祝顺利
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5楼2012-03-28 12:41:11
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wcy5945

木虫 (正式写手)
★ ★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-30 08:32:13
这个太正常了，一步法就是很多假阳性，多筛选多做，迟早会有对的，大量的重复工作
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6楼2012-03-29 23:15:39
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hyacinth326

金虫 (正式写手)
★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
我也在做基因敲除，上下游同源臂各1000，还是做细菌的，到目前为止，转了三次得到的基本都是假阳性~~~
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7楼2012-03-30 13:17:57
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王子扶苏

金虫 (小有名气)
★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
我做的同源臂分别是700和500，用醋酸锂做的化学转化，两次就转进去了。。。。不过受体是单倍体
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8楼2012-04-01 10:31:27
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刘玉佩

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
内容已删除
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9楼2012-04-05 17:08:33
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mm3545

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-27 20:39:57
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~

同学  你们做丝状真菌基因敲除是用的什么方法啊，电转化还是原生质体转化啊，求方法，教教俺啊
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10楼2013-04-16 08:58:45
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