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香蕉宝宝

木虫 (小有名气)

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[交流] 毕赤酵母基因重组时遇到困难了

目的基因大概800bp左右，同源臂设置了大概300bp，一直做电转化，两个多月了，长了N多假阳性，怎么办呢，急死了~~~~~~~~~各位对于做基因敲除有啥好的建议不！

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1楼 2012-03-27 16:47:35

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wcy5945

木虫 (正式写手)

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★ ★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-30 08:32:13

这个太正常了，一步法就是很多假阳性，多筛选多做，迟早会有对的，大量的重复工作

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6楼2012-03-29 23:15:39

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Petter_JDW

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-28 08:13:59

同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌上下游同源臂在最少1500~~

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2楼2012-03-27 20:39:57

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在长在的man

铁杆木虫 (正式写手)

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★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与

同意楼上，我协助学姐做的基因敲除，也存在这个问题来着，然后经老师指点，解决方法与楼上类似。

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3楼2012-03-27 23:15:56

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香蕉宝宝

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-27 20:39:57:
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌上下游同源臂在最少1500~~

但是目的基因前后的非编码区太短，我看来一下，最多同源臂只能是500bp

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4楼2012-03-28 12:10:18

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香蕉宝宝

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