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香蕉宝宝

木虫 (小有名气)


[交流] 毕赤酵母基因重组时遇到困难了

目的基因大概800bp左右,同源臂设置了大概300bp,一直做电转化,两个多月了,长了N多假阳性,怎么办呢,急死了~~~~~~~~~各位对于做基因敲除有啥好的建议不!
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在长在的man

铁杆木虫 (正式写手)



香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
同意楼上,我协助学姐做的基因敲除,也存在这个问题来着,然后经老师指点,解决方法与楼上类似。
3楼2012-03-27 23:15:56
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Petter_JDW

木虫 (小有名气)


★ ★ ★
香蕉宝宝(金币+1): 谢谢参与
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-28 08:13:59
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~
2楼2012-03-27 20:39:57
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香蕉宝宝

木虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by Petter_JDW at 2012-03-27 20:39:57:
同源臂太短了~至少也要600 700~太短了假阳性多~~我们做丝状真菌 上下游同源臂在最少1500~~

但是目的基因前后的非编码区太短,我看来一下,最多同源臂只能是500bp
4楼2012-03-28 12:10:18
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Petter_JDW

木虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 香蕉宝宝 at 2012-03-28 12:10:18:
但是目的基因前后的非编码区太短,我看来一下,最多同源臂只能是500bp

那就只有尽量设计长一些~~祝顺利
5楼2012-03-28 12:41:11
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