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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物退火温度
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欢仔

银虫 (正式写手)

[求助] 引物退火温度

大家好 我自己设计引物，引物合成单上的温度是63.8度 和 55.41度，在PCR扩增时我的退火温度怎么设计呢，是这两个温度的平均温度吗
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勇于尝试新鲜事物
1楼 2012-03-26 16:33:19
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
欢仔: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-03-27 20:24:12
西瓜: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-28 10:29:12
内容已删除
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11楼2012-03-27 13:46:35
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 欢仔 at 2012-03-27 20:25:04:
我才开始做，不太懂，以为梯度会会太浪费试剂

没有一定的目标和思路会走更多的弯路，当然会浪费更多的试剂
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16楼2012-03-27 22:34:28
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孙启亮

金虫 (著名写手)
★
西瓜: 金币+1, 很热心哈 2012-03-28 10:30:04
引用回帖:
11楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-03-27 13:46:35:
我觉得你直接做梯度就好了，自己实实在在做出来的才是最真实的。引物设计软件的Tm值也不准，一般要比你实际的低上5度左右。但是你设计的引物由于上下游Tm相差太大，所以必须要做梯度的，当然如果你试了一个温度恰 ...

打开链接后分别输入上下游引物的碱基，然后点击blast就行了
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17楼2012-03-27 22:36:52
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