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欢仔

银虫 (正式写手)

[求助] 引物退火温度

大家好 我自己设计引物,引物合成单上的温度是63.8度 和 55.41度,在PCR扩增时我的退火温度怎么设计呢,是这两个温度的平均温度吗
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勇于尝试新鲜事物
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 欢仔 at 2012-03-27 20:25:04:
我才开始做,不太懂,以为梯度会会太浪费试剂

没有一定的目标和思路会走更多的弯路,当然会浪费更多的试剂
16楼2012-03-27 22:34:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我一般先用低的温度作为Tm扩增,不行的话,再做梯度,不过一般只要引物没问题,选择低的那个都能扩出来。
Thank-you,so-blue.
3楼2012-03-26 16:38:18
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欢仔

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-26 16:37:48:
嗯...............
首先,不要看引物单子的Tm值,引物单子Tm值是有条件的,比如Na离子浓度等。
然后,你拿什么软件设计的引物,就按那个软件给出你的Tm值来设定退火

这么做有效果没,我软件给出的温度相差有点大
勇于尝试新鲜事物
4楼2012-03-26 17:03:16
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欢仔

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-03-26 16:38:18:
我一般先用低的温度作为Tm扩增,不行的话,再做梯度,不过一般只要引物没问题,选择低的那个都能扩出来。

哦……我试试吧,如果试了好几个温度,都出不来,是不是就说明引物有问题
还有个问题  电泳可以检测CDNA的好坏吗? 我做了,但是不知道结果是什么意思
勇于尝试新鲜事物
5楼2012-03-26 17:05:44
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