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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物退火温度
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 真热心，欢迎常来本版 2012-03-27 11:27:19
西瓜: 金币+3, MolEPI+1, Good! cDNA的质量可以看内参基因的扩增情况，内参没问题一般就认为cDNA很ok啦~ 2012-03-28 10:24:02
引用回帖:
5楼: Originally posted by 欢仔 at 2012-03-26 17:05:44:
哦……我试试吧，如果试了好几个温度，都出不来，是不是就说明引物有问题
还有个问题  电泳可以检测CDNA的好坏吗？ 我做了，但是不知道结果是什么意思

嗯...........刚还看到你这个问题
1. 不能说试了好几个温度，出不来就是引物的问题，在我们的实验经验中，严格的引物是必要的，之后的实验过程除非发生实在实在实在实在实在扩不出来的情况，才会考虑是引物的问题，你这样笼统就一开始认定引物有误，除非你引物设计的非常之夸张，是不能这样的，因为重新订引物既浪费钱又浪费时间。
2. 电泳不能检测cDNA的，同样分光光度计的检测也是不可以滴！不太确信你这个cDNA的好坏是指什么？为什么这样说呢，转录生成mRNA视基因的不同是有长有短的，同样也有反转录酶的效率问题，能够转完全转不完全也是个问题，所以你电泳检测cDNA得到的基本上是smear。同样你想尝试分光光度法也是因为对照样品怎么做的问题，是不可能实现的。所以你要想检测cDNA的好坏，无外乎只是完整性不完整性的问题，若是下游应用于qPCR，会有专门的5' & 3‘ GAPDH Gene完整性分析法。若是引用于基因克隆，感觉你P就是了，没有什么说专门测定cDNA好坏的说法。
以上纯属个人看法，如有错，请高手指正
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Let God do with it as He wills
7楼2012-03-26 23:02:48
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