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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 又是双酶切的问题

用pQE30双酶切加入目的片段，酶切位点（sPHI,Sal1）用NEB的HF，切了30分钟
是三个单菌落，出啦好多条带，怎么回事啊，我的目的片段504，我的载体3800左右（因为已经有一个片段了）。marker为：5000,3000,2000,1000,750,500,250,100.
我就剩一个怀疑的问题了：我构建这个质粒的时候，没有导入DH5α，导在了全式金公司的：Trans1-T1 Phage Resistant chemically Competent Cell
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潇灵玉雪

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1楼 2012-03-18 21:13:00
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wlwsnoopy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
junxiao0320: 金币+3, 博学EPI+1 2012-03-19 13:12:01
junxiao0320: 金币+3 2012-03-21 14:17:49
junxiao0320: 金币+1 2012-03-23 06:57:06
junxiao0320: 金币+8 2012-03-24 19:35:22
载体是不是也有这些酶切位点。。。。
三个菌落切的还不一样，是不是污染了。。。
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2楼2012-03-18 21:37:02
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生
引用回帖:
2楼: Originally posted by wlwsnoopy at 2012-03-18 21:37:02:
载体是不是也有这些酶切位点。。。。
三个菌落切的还不一样，是不是污染了。。。

质粒提完，就酶切了啊
就是照片中前面的质粒
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3楼2012-03-19 13:13:01
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生
引用回帖:
3楼: Originally posted by junxiao0320 at 2012-03-19 13:13:01:
质粒提完，就酶切了啊
就是照片中前面的质粒

，没有遇到过的吗？非常期待您的回复
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4楼2012-04-03 08:13:43
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生
引用回帖:
2楼: Originally posted by wlwsnoopy at 2012-03-18 21:37:02:
载体是不是也有这些酶切位点。。。。
三个菌落切的还不一样，是不是污染了。。。

载体污染啦，？会是哪个环节污染呢？
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5楼2012-04-03 08:14:24
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潇灵玉雪

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
您好  我也想做一下双酶切，而且我想要的是你这种图，你可以把你的体系告诉我一下吗？另外，你用的那两种酶是怎样进行筛选的？
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6楼2012-04-18 20:31:48
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