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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用16S扩V6-V8区总是拖尾并出现非特异性扩增怎么办？
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金陵小南

新虫 (初入文坛)

[求助] 用16S扩V6-V8区总是拖尾并出现非特异性扩增怎么办？

问题如题，退火温度提高过也降低多，循环次数也减少过，DNA模板也稀释过，都不大管用，希望哪位高手能给予指点！
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1楼 2012-03-16 09:37:14
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zhaoghit

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-03-18 17:51:59
你是要增加特异性，为什么减少循环数啊，增加循环数才能使得特异性更强。我建议你先把ＤＮＡ纯化下，用纯化试剂盒。你选择降落扩增也可以，这样效果能好些。循环数不要降。你在体系里面加些ＢＳＡ会有帮助。ＰＣＲ能扩出来理想的产物
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天道酬勤！
2楼2012-03-18 11:17:09
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
金陵小南: 金币+10 2012-04-06 08:00:16
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoghit at 2012-03-18 11:17:09:
你是要增加特异性，为什么减少循环数啊，增加循环数才能使得特异性更强。我建议你先把ＤＮＡ纯化下，用纯化试剂盒。你选择降落扩增也可以，这样效果能好些。循环数不要降。你在体系里面加些ＢＳＡ会有帮助。ＰＣＲ ...

循环数少的话，非特异扩增的量也少些吧。
降落PCR和BSA都是好方法啊。
个人觉得直接换引物可能更省事。另外，也可以考虑下巢式PCR。
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3楼2012-03-18 17:53:52
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