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跋涉者米米

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教一些宏基因组的问题,牛人来解答一下啊

最近准备做宏基因组文库,在网上也查看了一些资料,满脑子充满了疑惑,觉得一头雾水,不知道是自己天资愚笨还是怕麻烦,无奈总结总结,有这样几个问题急需大家的帮忙解答:
1、做宏基因组文库的时候,提取的DNA基因组进行电泳检测,用入-hind3DNAmarker 是否可以就根据平时的电泳检测条件一样,1%琼脂凝胶,100v电压跑了来检测呢?
2、纯化后的DNA进行酶切,我看有些资料是收集2-9KB的片段,如果我一个样品的DNA酶切后,比对MARKER发现2-9kb的片段有只有三个,我就对这三个进行回收,然后用这三个片段来作为连接的目的DNA么?
3、2-9kb的片段选择的载体可不可以都选择同一种载体pbluescriptsk+呢?
4、载体是不是要经过酶切和去磷酸化啊?载体的酶切所用的内切酶可以和DNA酶切的酶一样么,比如都用BamH1?
5、可不可以事先计算好需要多少个克隆子?一般一个平板上长多少个克隆子比较合适呢?
问题大概就是这些了,因为实在是很迷茫啊,问的问题可能有点低级,希望各位大侠不吝赐教,在此先谢过了。。。——!
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