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[求助]
请教一些宏基因组的问题，牛人来解答一下啊
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最近准备做宏基因组文库，在网上也查看了一些资料，满脑子充满了疑惑，觉得一头雾水，不知道是自己天资愚笨还是怕麻烦，无奈总结总结，有这样几个问题急需大家的帮忙解答： 1、做宏基因组文库的时候，提取的DNA基因组进行电泳检测，用入-hind3DNAmarker 是否可以就根据平时的电泳检测条件一样，1%琼脂凝胶，100v电压跑了来检测呢？ 2、纯化后的DNA进行酶切，我看有些资料是收集2-9KB的片段，如果我一个样品的DNA酶切后，比对MARKER发现2-9kb的片段有只有三个，我就对这三个进行回收，然后用这三个片段来作为连接的目的DNA么？ 3、2-9kb的片段选择的载体可不可以都选择同一种载体pbluescriptsk+呢？ 4、载体是不是要经过酶切和去磷酸化啊？载体的酶切所用的内切酶可以和DNA酶切的酶一样么，比如都用BamH1? 5、可不可以事先计算好需要多少个克隆子？一般一个平板上长多少个克隆子比较合适呢？ 问题大概就是这些了，因为实在是很迷茫啊，问的问题可能有点低级，希望各位大侠不吝赐教，在此先谢过了。。。——！ |
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