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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 细菌双向电泳样品制备：如何提取总蛋白？
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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 细菌双向电泳样品制备：如何提取总蛋白？

我是新手，之前也参考了一些方法，今天试验出了点儿状况，望高手指点一下。我的试验过程如下：
培养了100ml菌体（肺炎克雷伯，G-）16h,收集菌体，用20mM Tris清洗两遍后，加入了1ml的裂解缓冲液（8M尿素，65mM DTT，10mM Tris，2mM PMSF）重悬菌体。
（因为我的菌为临床治病菌故不想在露天环境中超声，先选择反复冻融试试。）
反复冻融法：液氮20s后置34度水浴，反复了八九次。不见澄清，于是无奈又进行了超声。结果一超就出现大量泡沫，无法进行。
请问各位虫友：菌体选用什么方法破裂好呢，溶菌酶法加入的溶菌酶是否影响结果分析；还有，我的菌体量是否过多了？
谢谢

[ Last edited by youngsun50 on 2012-3-6 at 07:47 ]
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1楼 2012-03-05 16:41:08
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