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youngsun50

木虫 (正式写手)

[求助] 细菌双向电泳样品制备:如何提取总蛋白?

我是新手,之前也参考了一些方法,今天试验出了点儿状况,望高手指点一下。我的试验过程如下:
培养了100ml菌体(肺炎克雷伯,G-)16h,收集菌体,用20mM Tris清洗两遍后,加入了1ml的裂解缓冲液(8M尿素,65mM DTT,10mM Tris,2mM PMSF)重悬菌体。
(因为我的菌为临床治病菌故不想在露天环境中超声,先选择反复冻融试试。)
反复冻融法:液氮20s后置34度水浴,反复了八九次。不见澄清,于是无奈又进行了超声。结果一超就出现大量泡沫,无法进行。
请问各位虫友:菌体选用什么方法破裂好呢,溶菌酶法加入的溶菌酶是否影响结果分析;还有,我的菌体量是否过多了?
谢谢

[ Last edited by youngsun50 on 2012-3-6 at 07:47 ]
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