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bolomeer

铜虫 (小有名气)

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[交流] 试剂疑问

请问 1.在什么情况下使用10Xloading buffer，请举例说明一下。 2.TBE和TAB缓冲溶液在用途上有什么差别? 3.什么原因会造成成聚丙烯酰胺凝胶不凝固？（非忘加试剂，另外试剂是四个小时前配置的，TEMED也进行了避光处理）谢谢前辈们的详细解答。

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1楼 2012-03-04 17:13:20

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bolomeer

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-04 18:38:18:
1 我理解楼主所说的10Xloading buffer适用于电泳时用的那种东西，按1/10体积加入样品，具体成分和使用方法最好参考随buffer的说明书。如果是宝生物买的那种，10Xloading buffer含有SDS，可以让taq酶变性，终止反应 ...

谢谢你的讲解

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4楼2012-03-04 19:55:51

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starseacow

专家顾问 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
bolomeer(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+5, MolEPI+1): 鼓励积极应助！ 2012-03-04 20:19:55

1 我理解楼主所说的10Xloading buffer适用于电泳时用的那种东西，按1/10体积加入样品，具体成分和使用方法最好参考随buffer的说明书。如果是宝生物买的那种，10Xloading buffer含有SDS，可以让taq酶变性，终止反应，另外，10Xloading buffer仅含有溴酚蓝，电泳时与300 bp DNA迁移速度相同。
2 TAE和TBR都是常用的电泳缓冲液，相比较来说，TBE缓冲能力强，适用于长时间电泳，同时分辨能力也高于TAE，对于分离小于1000 bp片段，效果好一些。但TBE不适用于琼脂糖凝胶回收电泳，因为其易与琼脂糖发生反应，影响DNA回收率。此外，TBE离子强度高，对后续反应可能有影响。具体如何选用最好按照相关实验说明书要求。
3 影响胶凝的因素包括：APS失效，温度偏低
如果试剂都没问题，可以考虑多用点TEMED，胶配好后放30度烘箱里，一会就凝了