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试剂疑问
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| 请问 1.在什么情况下使用10Xloading buffer，请举例说明一下。 2.TBE和TAB缓冲溶液在用途上有什么差别? 3.什么原因会造成成聚丙烯酰胺凝胶不凝固？（非忘加试剂，另外试剂是四个小时前配置的，TEMED也进行了避光处理）谢谢前辈们的详细解答。 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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starseacow
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bolomeer(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+5, MolEPI+1): 鼓励积极应助！ 2012-03-04 20:19:55
bolomeer(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+5, MolEPI+1): 鼓励积极应助！ 2012-03-04 20:19:55
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1 我理解楼主所说的10Xloading buffer适用于电泳时用的那种东西，按1/10体积加入样品，具体成分和使用方法最好参考随buffer的说明书。如果是宝生物买的那种，10Xloading buffer含有SDS，可以让taq酶变性，终止反应，另外，10Xloading buffer仅含有溴酚蓝，电泳时与300 bp DNA迁移速度相同。 2 TAE和TBR都是常用的电泳缓冲液，相比较来说，TBE缓冲能力强，适用于长时间电泳，同时分辨能力也高于TAE，对于分离小于1000 bp片段，效果好一些。但TBE不适用于琼脂糖凝胶回收电泳，因为其易与琼脂糖发生反应，影响DNA回收率。此外，TBE离子强度高，对后续反应可能有影响。具体如何选用最好按照相关实验说明书要求。 3 影响胶凝的因素包括：APS失效，温度偏低 如果试剂都没问题，可以考虑多用点TEMED，胶配好后放30度烘箱里，一会就凝了 |
2楼2012-03-04 18:38:18
3楼2012-03-04 19:12:40
4楼2012-03-04 19:55:51
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5楼2012-03-05 18:14:28
starseacow
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文献我也没有，这些注意事项是以前学做试验时听前辈师兄讲的，其原理是“TBE 中的硼酸与琼脂糖生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而降低DNA 回收率”（为了准确描述，我从某凝胶回收试剂盒说明上抄的） http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=1204321953r7yt688677bq5g |
6楼2012-03-06 01:12:48
