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[求助]
请教有关提取人肝脏组织RNA提取的技术 已有3人参与
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各位高手，本菜鸟提取肝组织RNA大半个月仍未能成功，跪求各位高手帮助，感激涕零！ 我将组织放在研钵中液氮研磨， 将组织研磨到粉末后加1ml trizol到研钵中，继续研磨成粉末后放入超净台中等待融化，之后将液体吸入EP管进行RNA提取。说明书上提到1ml TRIZOL可以溶解50——100mg组织，但我加入50mg组织后产生大量沉淀，且液体呈现黑色，似乎无法溶完这么多组织，且后续电泳表明RNA降解，而加入较少的组织(10mg左右)提取的RNA又很少，估计只有几微克，浓度太低无法使用。想请问各位高手，肝组织是RNA含量较高的组织，为何我研磨的很细了还是提不出足够量的RNA？1mlTRIZOL应溶解多少mg组织合适？ 另外列上后面的RNA提取步骤，请各位高手指正： 1、TRIZOL移入EP管后，吹打混匀（我们实验室没有匀浆机，只能将粉末研磨到足够细） 2、12000rmp离心10分钟离去不溶物（省略该部是否会影响RNA得率？） 3、室温放置10min, 加入氯仿200ul/每管，剧烈震荡15s,冰上放置5min(有网友提到要放置15min,但我放置15min后离心上层呈现淡黄色，蛋白层变薄，不知有没有问题) 4、取上清（上清的液体量多是否表明RNA得量多？） 5、500ul 异丙醇沉淀，冰置10min,12000rmp离心10min. 6、1ml 75%乙醇洗一遍，12000rmp 离心5min 7、超净台晾干5min,加入Rnase-free 水 急盼各位高手回复 ，谢谢！ |
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4楼2018-12-10 10:52:23
2楼2012-08-14 18:25:00
3楼2018-10-21 20:18:55
5楼2019-03-11 09:03:09
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