应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教有关提取人肝脏组织RNA提取的技术
51/1返回列表
查看: 4121  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liumangtu403

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教有关提取人肝脏组织RNA提取的技术 已有3人参与

各位高手，本菜鸟提取肝组织RNA大半个月仍未能成功，跪求各位高手帮助，感激涕零！
我将组织放在研钵中液氮研磨， 将组织研磨到粉末后加1ml trizol到研钵中，继续研磨成粉末后放入超净台中等待融化，之后将液体吸入EP管进行RNA提取。说明书上提到1ml TRIZOL可以溶解50——100mg组织，但我加入50mg组织后产生大量沉淀，且液体呈现黑色，似乎无法溶完这么多组织，且后续电泳表明RNA降解，而加入较少的组织(10mg左右)提取的RNA又很少，估计只有几微克，浓度太低无法使用。想请问各位高手，肝组织是RNA含量较高的组织，为何我研磨的很细了还是提不出足够量的RNA？1mlTRIZOL应溶解多少mg组织合适？
   另外列上后面的RNA提取步骤，请各位高手指正：
                        1、TRIZOL移入EP管后，吹打混匀（我们实验室没有匀浆机，只能将粉末研磨到足够细）
                         2、12000rmp离心10分钟离去不溶物（省略该部是否会影响RNA得率？）
                         3、室温放置10min, 加入氯仿200ul/每管，剧烈震荡15s,冰上放置5min(有网友提到要放置15min,但我放置15min后离心上层呈现淡黄色，蛋白层变薄，不知有没有问题)
                        4、取上清（上清的液体量多是否表明RNA得量多？）
                        5、500ul 异丙醇沉淀，冰置10min,12000rmp离心10min.
                       6、1ml 75%乙醇洗一遍，12000rmp 离心5min
                        7、超净台晾干5min,加入Rnase-free 水
急盼各位高手回复 ，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-02 20:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可怜我的生活

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

要不要试一试，先加入trizol，然后加入液氮，在进行研磨？我也没有具体的做过这个实验，
赞一下 回复此楼
3楼2018-10-21 20:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

dodou

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议你用2ml的管子提取，加60mg的样品 记住，不得多啊 ，1.5ml的Trizol，剧烈震荡，离心取上清则按照原来的步骤继续就可以!
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-14 18:25:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验加油

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2018-12-10 10:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用Trizol能提RNA的，个人比觉得还要需要从提量下手，我们实验室用BIODAI离心提取法单次处理的样本量可以达到1000μL，楼主需要注意用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。
赞一下 回复此楼
5楼2019-03-11 09:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 材料专业求调剂 +9 hanamiko 2026-03-18 9/450 2026-03-23 21:14 by 无际的草原
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +3 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:47 by pswait
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +3 cccchenso 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:55 by pswait
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭