应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教有关提取人肝脏组织RNA提取的技术
51/1返回列表
查看: 4335  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liumangtu403

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教有关提取人肝脏组织RNA提取的技术 已有3人参与

各位高手，本菜鸟提取肝组织RNA大半个月仍未能成功，跪求各位高手帮助，感激涕零！
我将组织放在研钵中液氮研磨， 将组织研磨到粉末后加1ml trizol到研钵中，继续研磨成粉末后放入超净台中等待融化，之后将液体吸入EP管进行RNA提取。说明书上提到1ml TRIZOL可以溶解50——100mg组织，但我加入50mg组织后产生大量沉淀，且液体呈现黑色，似乎无法溶完这么多组织，且后续电泳表明RNA降解，而加入较少的组织(10mg左右)提取的RNA又很少，估计只有几微克，浓度太低无法使用。想请问各位高手，肝组织是RNA含量较高的组织，为何我研磨的很细了还是提不出足够量的RNA？1mlTRIZOL应溶解多少mg组织合适？
   另外列上后面的RNA提取步骤，请各位高手指正：
                        1、TRIZOL移入EP管后，吹打混匀（我们实验室没有匀浆机，只能将粉末研磨到足够细）
                         2、12000rmp离心10分钟离去不溶物（省略该部是否会影响RNA得率？）
                         3、室温放置10min, 加入氯仿200ul/每管，剧烈震荡15s,冰上放置5min(有网友提到要放置15min,但我放置15min后离心上层呈现淡黄色，蛋白层变薄，不知有没有问题)
                        4、取上清（上清的液体量多是否表明RNA得量多？）
                        5、500ul 异丙醇沉淀，冰置10min,12000rmp离心10min.
                       6、1ml 75%乙醇洗一遍，12000rmp 离心5min
                        7、超净台晾干5min,加入Rnase-free 水
急盼各位高手回复 ，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-02 20:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dodou

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议你用2ml的管子提取，加60mg的样品 记住，不得多啊 ，1.5ml的Trizol，剧烈震荡，离心取上清则按照原来的步骤继续就可以!
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-14 18:25:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可怜我的生活

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

要不要试一试，先加入trizol，然后加入液氮，在进行研磨？我也没有具体的做过这个实验，
赞一下 回复此楼
3楼2018-10-21 20:18:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验加油

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2018-12-10 10:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用Trizol能提RNA的，个人比觉得还要需要从提量下手，我们实验室用BIODAI离心提取法单次处理的样本量可以达到1000μL，楼主需要注意用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。
赞一下 回复此楼
5楼2019-03-11 09:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liumangtu403 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +26 yaoyewhu2008 2026-08-20 28/1400 2026-08-26 13:49 by zzuzxg
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭