应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何P一个全长基因？
141/1返回列表
查看: 4157  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hshzhq

铜虫 (正式写手)

[交流] 如何P一个全长基因？

现在P某个基因的CDS全长序列，一般是按照ATG开头和TGA/TAG结尾设计20个以上的引物，那么如果引物序列是在20-30个长的话，需要注意哪些信息才能设计出比较好的优化的引物呢？
平常大家都说25、26个左右就可以了，但是做实验当然希望能优化一下比较好，一般大家是用哪种软件优化的？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子问题及解决方案汇总

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-01 11:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hubinghello

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
完整的cds是包括5‘和3’UTR的，这个结果出来了实验也做差不多了。
但是实验过程中，我们口头上讲的全长是指ORF，从ATG到TAG/TAA/TGA。
赞一下(2人) 回复此楼
13楼2012-05-12 14:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eagle00768

木虫 (小有名气)
★ ★
hshzhq(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+1): 鼓励 2012-03-01 17:04:53
用DNAMAN试试，我们一般用这个设计出来的引物效果还不错，把引物序列输进去，然后它会给你分析有没有自连现象，也会出来退火温度和GC含量等，一般GC含量选用40%-60%，两条引物之间的退火温度不要相差太大，最好不要超过15度吧，长度的话，我一般都是先输入21个碱基，然后再根据分析的结果进行调整。不知道这个对你有没有帮助
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-03-01 11:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)
★ ★
hshzhq(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+1): 鼓励 2012-03-01 17:05:06
设计引物可以试试NCBI的在线工具Primer-BLAST
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tool ... ?LINK_LOC=BlastHome

扩基因全长建议采用巢式PCR。先设计一对质量较高、产物较大（至少包含基因的编码区全长）的引物，扩出目的片段后作为模板，再用用于分子克隆的引物扩增。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-03-01 12:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

22148942

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+2): 鼓励 2012-03-03 11:46:06
1 对于已知基因，可以在编码区两端设计引物，直接扩增就可以了，然后总RACE，扩增基因全长；
2 如果要从某个基因家族里获取相应基因，可以通过基因序列比对，在高度保守区内设计引物，进行扩增后测序，根据测序结果设计合适的引物做RACE，就可以得到基因的全长了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-03-02 15:03:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

22148942

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by hshzhq at 2012-03-10 23:41:56:
这里是要P出基因的全长，标准全长就是完成的CDS序列，不知道这些人回答的时候都在想什么。又不是不知道全长序列的。

基因的全长就是CDS序列？你这个定义就不对
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-03-11 11:42:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiafeimao21

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by hshzhq at 2012-03-13 15:16:30:
楼上的是第一次做实验？要跟你解释完整的内含子和外显子序列吗？是不是说太阳出来还不许是跟大家说明太阳是从东边出来啊？

在地球上，太阳确实从东边升起。不过在金星上可就相反了。确实需要说明一下吧。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2012-03-16 11:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

快乐的小傻瓜

木虫 (著名写手)
挺有用的。。。
回复此楼
5楼2012-03-02 22:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

华晔-123

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 22148942 at 2012-03-02 15:03:55:
1 对于已知基因，可以在编码区两端设计引物，直接扩增就可以了，然后总RACE，扩增基因全长；
2 如果要从某个基因家族里获取相应基因，可以通过基因序列比对，在高度保守区内设计引物，进行扩增后测序，根据测序结 ...

我是菜鸟.....扩增出来后 为什么还要RCSE，直接纯化测序不行吗？
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-09 23:36:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingxing8713

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 华晔-123 at 2012-03-09 23:36:41:
我是菜鸟.....扩增出来后 为什么还要RCSE，直接纯化测序不行吗？

跑偏了。。。。能直接扩全长，为啥还要Race。浪费时间和金钱呢
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-10 11:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hshzhq

铜虫 (正式写手)
这里是要P出基因的全长，标准全长就是完成的CDS序列，不知道这些人回答的时候都在想什么。又不是不知道全长序列的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-10 23:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hshzhq

铜虫 (正式写手)
楼上的是第一次做实验？要跟你解释完整的内含子和外显子序列吗？是不是说太阳出来还不许是跟大家说明太阳是从东边出来啊？
赞一下 回复此楼
10楼2012-03-13 15:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kether

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 22148942 at 2012-03-02 15:03:55:
1 对于已知基因，可以在编码区两端设计引物，直接扩增就可以了，然后总RACE，扩增基因全长；
2 如果要从某个基因家族里获取相应基因，可以通过基因序列比对，在高度保守区内设计引物，进行扩增后测序，根据测序结 ...

请问，如果是原核生物里面的某个基因，要想得到基因全长，能用RACE吗？
赞一下 回复此楼
11楼2012-03-15 20:55:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qaz139687

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by hubinghello at 2012-05-12 14:39:10
完整的cds是包括5‘和3’UTR的，这个结果出来了实验也做差不多了。
但是实验过程中，我们口头上讲的全长是指ORF，从ATG到TAG/TAA/TGA。

着么判断5’UTR是否全了呢？是不是克隆基因，只要拿到完整的ORF框，然后前面有一些碱基，不管5’UTR有多长都可以算全长了呢？
赞一下 回复此楼
14楼2015-07-17 14:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hshzhq 的主题更新
141/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +10 lzmk 2026-04-14 11/550 2026-04-19 16:42 by 中豫男
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 297，工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 297，工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭