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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达引物设计的问题
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匿名

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1楼2012-02-19 11:33:43
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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-21 10:09:15
facingworld(金币+3): ★★★很有帮助 谢谢你啦！ 2012-02-21 14:47:01
pET-28a在t7启动子下游有自带的SD序列和ATG，你的片段带不带ATG没啥影响。至于纯化，2个组氨酸标签肯定更容易纯化。28a只有一个组氨酸标签。b有2个，你可以把你的OPF的TAA通过引物设计去掉，这样可以带上2个HIS。
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无善无恶心之体
4楼2012-02-21 10:01:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！辛苦哈~ 2012-02-19 18:48:56
facingworld(金币+10): ★★★很有帮助 谢谢你啦！ 2012-02-21 09:32:20
1、不用去掉TAA和ATG（注意：TAA不是终止子，是终止密码子，ATG，是起始密码子，概念要搞清楚！）。
2、pET-28a（+）用BamHl(198)和Xhol(158）位点不会造成移码突变的。
3、pET-28a（+）只有一个his-tag，不是你说的两个，pET-28b（+）才有两个his-tag。
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2楼2012-02-19 15:13:17
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匿名

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3楼2012-02-21 09:35:13
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ding_winnie

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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facingworld(金币+3): ★★★很有帮助 谢谢了! 2012-02-21 14:48:32
如果要用his纯化，最好设计三个，一个在上游，一个在下游，还有上下游都有的，因为加入his可能会影响蛋白的折叠。。。这是我个人的理解。。。
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5楼2012-02-21 10:10:30
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