应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点
51/1返回列表
查看: 9923  |  回复: 55
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌感受态转化子总是空载体，请高手指点

最近做克隆测序，非常不顺利，很苦恼。简单描述一下：
目的片段1.5kb，使用的是TAKARA pMD19-T载体，载体和PCR产物比例为1:4左右，4度连接过夜，转化DH5a感受态细胞，以control片段做对照，42度热击，复壮后涂amp板子，培养14小时候，平板上有菌落长出来（解释一下：为了省事，没有加x-gal和IPTG），但是在做菌落PCR验证时，阳性克隆很少很少，是怎么回事啊？求各位高手指点一下，谢谢了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2012-02-19 11:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我叫路人甲

银虫 (小有名气)
★
mirror3895(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+2): 鼓励积极交流哦 2012-02-20 08:06:24
你看载体的说明说，是在什么温度下多长时间连的。
我们用promega的载体4°，过夜连的，效果也还不错。
目的片段也是1.5k
赞一下 回复此楼
12楼2012-02-19 18:16:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 56 个回答

Petter_JDW

木虫 (小有名气)
★
mirror3895(金币+1):谢谢参与
16度连接过夜~~~~~4度咋么行
赞一下 回复此楼
2楼2012-02-19 12:39:53
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dappxiaomm

金虫 (小有名气)
★
mirror3895(金币+1):谢谢参与
16度连接过夜啊。。。。。还有可能就是你制备的感受态有问题，换一批试试。
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-19 13:11:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
mirror3895(金币+1):谢谢参与
连接效率太差的缘故，用16度连接过夜，4度连接时间要更长的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-19 15:14:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 56 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭