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格格Caroline

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质很纯，但不长晶体

小妹刚刚学习蛋白质结晶，有很多不会的地方。
我做的蛋白350个aa，很纯了，点晶体就是不长，不是直接沉淀了就是透明的，预测了没有什么信号肽之类的，求助啊！！！！！！！就是不长~！！！！我应该在哪些方面在进行改进呢！！！谢谢谢谢！
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1楼 2012-02-14 21:34:37
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BioChemCom

银虫 (小有名气)
格格Caroline: 回帖置顶 2012-02-15 20:26:04
西瓜(金币+3): Good！ 2012-02-15 22:21:27
这个方面的问题，其实挺复杂的，你给出的哦信息也不够明确。我觉得有几件事情需要考虑。
1. 你的蛋白构建是不是够好，两端的无规则序列是否删除了？
2. 就算两端都删除了，还是要做一系列的截断构建，用于探索可能的稳定表达的结构域。这些可以通过已有的晶体结构、生物信息学相关的分析软件来获得信息。
3. 纯化过程，也有一些问题要考虑，温度、Ni-NTA，分子筛和离子柱。

希望有更详细的信息。
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3楼2012-02-15 17:16:51
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wgl365

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
格格Caroline: 回帖置顶 2012-02-15 20:30:22
格格Caroline: 取消置顶 2012-02-15 20:30:43
你点晶体要用那个筛选试剂盒呀！有很多条件的呀！都不长吗？
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思想是行动的种子！
2楼2012-02-15 17:12:29
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nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ph 和沉淀剂浓度 是最先考虑的
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不让吃就去死
4楼2012-02-15 20:02:05
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格格Caroline

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by BioChemCom at 2012-02-15 17:16:51:
这个方面的问题，其实挺复杂的，你给出的哦信息也不够明确。我觉得有几件事情需要考虑。
1. 你的蛋白构建是不是够好，两端的无规则序列是否删除了？
2. 就算两端都删除了，还是要做一系列的截断构建，用于探索可 ...

我的蛋白是个乙烯形成酶，我拿软件预测了，应该是没有信号肽之类的，但是不同软件预测的二级结构不同，搞得我想截断也不知道确切去哪里截。

然后...我今天考虑到是不是加点Mn离子 和akg.看能不能长晶体。

再就是，我最后能想出的是 建模之后预测至少有一个二硫键，看加点DTT？
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5楼2012-02-15 20:28:47
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