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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何从基因组中扩增出一长5kb的片断进行克隆
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20号马努

金虫 (小有名气)

[求助] 如何从基因组中扩增出一长5kb的片断进行克隆

近日发现细菌基因组中有一段长5kb的功能区，这么长的片断应如何做PCR?
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1楼 2012-02-06 09:47:10
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bst5

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone(金币+1): 同意 2012-02-06 12:01:23
可以直接p，用好一点的酶;也可以分段p，最后再连起来，较麻烦
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2楼2012-02-06 11:11:24
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Ag6501

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone(金币+2): 很好 2012-02-06 12:01:36
5Kb不算很长的，你引物设为40个碱基，用高保真酶，退火温度别弄得太高，还是比较容易的
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阳光倾城！
3楼2012-02-06 11:44:14
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Primer STAR 还行！以前扩过7K的片段
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jiayoubashaonian
4楼2012-02-06 12:30:57
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woshizhufeng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接pcr就可以了，去年我认识的直接p的7kb的。不过没要用高保真的。
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5楼2012-08-16 17:14:15
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子云99

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用巢式PCR的方法在基因组中扩大片段会更加准确和好扩些
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简单小研
6楼2012-08-16 22:14:11
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