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20号马努

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[求助] 如何从基因组中扩增出一长5kb的片断进行克隆

近日发现细菌基因组中有一段长5kb的功能区，这么长的片断应如何做PCR?

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1楼 2012-02-06 09:47:10

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bst5

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
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1949stone(金币+1): 同意 2012-02-06 12:01:23

可以直接p，用好一点的酶;也可以分段p，最后再连起来，较麻烦

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2楼2012-02-06 11:11:24

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Ag6501

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【答案】应助回帖

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1949stone(金币+2): 很好 2012-02-06 12:01:36

5Kb不算很长的，你引物设为40个碱基，用高保真酶，退火温度别弄得太高，还是比较容易的

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阳光倾城！

3楼2012-02-06 11:44:14

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blackrose8089

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Primer STAR 还行！以前扩过7K的片段

jiayoubashaonian

4楼2012-02-06 12:30:57

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woshizhufeng

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直接pcr就可以了，去年我认识的直接p的7kb的。不过没要用高保真的。

5楼2012-08-16 17:14:15

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子云99

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用巢式PCR的方法在基因组中扩大片段会更加准确和好扩些

简单小研

6楼2012-08-16 22:14:11

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