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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC基线问题请教
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renchailp

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC基线问题请教

小弟关于HPLC基线有些疑问，抓了3张屏，请大家看看，给点意见，非常感谢！

仪器是varian prep star, 紫外检测器，可以同时检测190~900nm的吸收。

第一张图片有很多锯齿形状的基线，这代表是气泡吗？还是什么别的原因？

第二和第三张图片是同一次run，没有打样品，分别是192nm和255nm的吸收。淋洗条件是60分钟从50%乙腈/水升到100%乙腈，192nm的吸收特别的杂，但是在255nm基线还算平整。我查了下乙腈的UV cutoff 是190nm，是不是表示这些杂峰就不是乙腈了？这是不是代表这个柱子脏得不行了？我淋洗了好几个小时都是这个样子

非常感谢，金币一定送上！

气泡吗？



192nm吸收



255nm吸收
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1楼 2012-01-14 12:56:35
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wqs43

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
renchailp(金币+1): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:36
不是柱子脏。应该是流动池内有气泡，也就是说，流动池内有缓冲液，而缓冲液与乙腈互溶性不大好，所以就出现正弦波一样的基线。建议楼主不接柱子，先用水冲洗几分钟，能后再用甲醇冲洗，最后再用乙腈冲洗，看看问题有没有解决好。
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2楼2012-01-14 13:41:22
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就爱小糊兔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
renchailp(金币+1): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:20
可能有气泡，可以突然提高流速排除气泡，由0.2----1ml/min（效果挺好，影响机子寿命）
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加油
3楼2012-01-14 13:55:14
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
renchailp(金币+2): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:05
第一张图片
1、检测器问题，譬如检测池有气泡、检测池污染（卸下取出凸镜等配件异丙醇超声清洗）；譬如氘灯老化、光栅老化、电路板故障灯（自检、工程师——更换配件）
2、电源电压问题（使用稳压电源）
3、静电干扰（检查地线是否脱落）
4、流动相问题，有气泡或者所用试剂杂质限度高。（超声、更换、通过不跑流动相时考察基线状态判断）
5、色谱柱污染、管路污染（这种情况基线波动不会太过规律，估计不是）


第二和第三张图片
背景吸收问题，200nm左右，背景吸收都很高，使用默克试剂，因杂质限度问题，背景吸收相对较小。
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守候在风中的宁静。
4楼2012-01-14 22:47:56
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zulovexin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
renchailp(金币+1): thank you so much!!! 2012-01-15 08:32:19
西湖醉鱼(金币+1): 欢迎来到分析版指导 2012-01-15 18:43:51
如果选择乙腈做流动相，最好不要选择200nm附近的波长！！
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5楼2012-01-15 08:16:21
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zz831024

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
renchailp(金币+1): thank you so much!!! 2012-01-16 02:00:30
200nm以下才有较大吸收说明这个物质已经不适合紫外检测器了，在这个波长下基线有波动是常见的，更何况你走的还是梯度。是不是进气泡了看压力是否正常。
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renchailp
6楼2012-01-15 16:55:12
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renchailp

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by zz831024 at 2012-01-15 02:55:12:
200nm以下才有较大吸收说明这个物质已经不适合紫外检测器了，在这个波长下基线有波动是常见的，更何况你走的还是梯度。是不是进气泡了看压力是否正常。

有气泡是压力下降对吧？
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7楼2012-01-16 02:00:05
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40514007

铁杆木虫 (著名写手)
★
西湖醉鱼(金币+1, ACI+1): 欢迎来到分析版指导 2012-01-16 17:56:01
西湖醉鱼(ACI-1): 2012-01-16 17:56:19
上面几位楼主基本已经说出了原因，但具体是什么原因还得一步一步排除：首先，排除是否接口漏液；然后，不装柱子看看基线问题；如有问题更改检测波长，避免检测波长的影响；还有就是排除流动相的影响，改变流动相比例和流速；等以上问题排除完毕基线稳定之后再装柱子，对比基线。暂时能总结这么多，还请补充。
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8楼2012-01-16 11:24:53
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renchailp

铜虫 (小有名气)
非常感谢大家的回复。经过反复淋洗比较，结果是气泡的原因造成基线偏差如此之大。我以前从来没有想过气泡会造成这么宽的峰，可能气泡实在是太多了吧， 解决的办法是在检测器流出管子上接一个塑料的东西提高压力到40（我不确定是psi还是bar），这样从检测器流出的都没有气泡了基线非常平，happy ending
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9楼2012-01-20 10:07:27
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