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renchailp

铜虫 (小有名气)

[求助] HPLC基线问题请教

小弟关于HPLC基线有些疑问,抓了3张屏,请大家看看,给点意见,非常感谢!

仪器是varian prep star, 紫外检测器,可以同时检测190~900nm的吸收。

第一张图片有很多锯齿形状的基线,这代表是气泡吗?还是什么别的原因?

第二和第三张图片是同一次run,没有打样品,分别是192nm和255nm的吸收。淋洗条件是60分钟从50%乙腈/水升到100%乙腈,192nm的吸收特别的杂,但是在255nm基线还算平整。我查了下乙腈的UV cutoff 是190nm,是不是表示这些杂峰就不是乙腈了?这是不是代表这个柱子脏得不行了?我淋洗了好几个小时都是这个样子

非常感谢,金币一定送上!

气泡吗?



192nm吸收



255nm吸收
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renchailp

铜虫 (小有名气)

非常感谢大家的回复。经过反复淋洗比较,结果是气泡的原因造成基线偏差如此之大。我以前从来没有想过气泡会造成这么宽的峰,可能气泡实在是太多了吧, 解决的办法是在检测器流出管子上接一个塑料的东西提高压力到40(我不确定是psi还是bar),这样从检测器流出的都没有气泡了基线非常平,happy ending
9楼2012-01-20 10:07:27
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wqs43

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
renchailp(金币+1): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:36
不是柱子脏。应该是流动池内有气泡,也就是说,流动池内有缓冲液,而缓冲液与乙腈互溶性不大好,所以就出现正弦波一样的基线。建议楼主不接柱子,先用水冲洗几分钟,能后再用甲醇冲洗,最后再用乙腈冲洗,看看问题有没有解决好。
2楼2012-01-14 13:41:22
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就爱小糊兔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
renchailp(金币+1): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:20
可能有气泡,可以突然提高流速排除气泡,由0.2----1ml/min(效果挺好,影响机子寿命)
加油
3楼2012-01-14 13:55:14
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
renchailp(金币+2): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:05
第一张图片
1、检测器问题,譬如检测池有气泡、检测池污染(卸下取出凸镜等配件异丙醇超声清洗);譬如氘灯老化、光栅老化、电路板故障灯(自检、工程师——更换配件)
2、电源电压问题(使用稳压电源)
3、静电干扰(检查地线是否脱落)
4、流动相问题,有气泡或者所用试剂杂质限度高。(超声、更换、通过不跑流动相时考察基线状态判断)
5、色谱柱污染、管路污染(这种情况基线波动不会太过规律,估计不是)


第二和第三张图片
背景吸收问题,200nm左右,背景吸收都很高,使用默克试剂,因杂质限度问题,背景吸收相对较小。
守候在风中的宁静。
4楼2012-01-14 22:47:56
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