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renchailp

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[求助] HPLC基线问题请教

小弟关于HPLC基线有些疑问，抓了3张屏，请大家看看，给点意见，非常感谢！

仪器是varian prep star, 紫外检测器，可以同时检测190~900nm的吸收。

第一张图片有很多锯齿形状的基线，这代表是气泡吗？还是什么别的原因？

第二和第三张图片是同一次run，没有打样品，分别是192nm和255nm的吸收。淋洗条件是60分钟从50%乙腈/水升到100%乙腈，192nm的吸收特别的杂，但是在255nm基线还算平整。我查了下乙腈的UV cutoff 是190nm，是不是表示这些杂峰就不是乙腈了？这是不是代表这个柱子脏得不行了？我淋洗了好几个小时都是这个样子

非常感谢，金币一定送上！

气泡吗？

192nm吸收

255nm吸收

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1楼2012-01-14 12:56:35

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痴夷子皮

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
renchailp(金币+2): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:05

第一张图片
1、检测器问题，譬如检测池有气泡、检测池污染（卸下取出凸镜等配件异丙醇超声清洗）；譬如氘灯老化、光栅老化、电路板故障灯（自检、工程师——更换配件）
2、电源电压问题（使用稳压电源）
3、静电干扰（检查地线是否脱落）
4、流动相问题，有气泡或者所用试剂杂质限度高。（超声、更换、通过不跑流动相时考察基线状态判断）
5、色谱柱污染、管路污染（这种情况基线波动不会太过规律，估计不是）

第二和第三张图片
背景吸收问题，200nm左右，背景吸收都很高，使用默克试剂，因杂质限度问题，背景吸收相对较小。