24小时热门版块排行榜    

查看: 2408  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

苹果晒太阳

新虫 (小有名气)

[求助] southern blot 的酶切问题

最近在做southern blot ,用CTAB法大量提取水稻DNA,之后用了好几种常见的酶想将其基因组DNA进行酶切,都没法切完全。降低了酶切DNA的量(之前用50μl 体系,DNA量是根据酶的说明书上的浓度换算的,大概5μl左右,5μl酶。现在将DNA量减至1μl),过夜酶切,第二天补酶再切3小时,仍是无法完全酶切。请各位大侠帮忙分析分析。在下感激不尽!

[ Last edited by 苹果晒太阳 on 2012-1-3 at 15:02 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyongqin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sunwei57 at 2012-03-17 11:35:56
加大体系到400Ul,加40 UL的酶量,酶切24小时后检测没有主条带或弥散条带明显即可,无水乙醇沉淀40UL溶解上样,有时候你很难酶切完全

400Ul,加40 UL的酶量,酶量太大了吧,我一般是200ul体系,5ul酶
(20u/ul),酶切过夜即可。
8楼2012-06-13 16:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+4): 鼓励发帖交流! 2012-01-03 17:32:46
对于基因组DNA酶切,难度稍微大些。一般切不彻底的原因是提取的DNA纯度不够。我的经验是反复苯酚、氯仿抽提多次。
在酶切的时候要注意:看说明书上酶的最适宜的浓度和温度还有适宜的缓冲液浓度。楼主不是用的一种酶吧。原则是温度不同要先进行温度低的进行。浓度不同要先进行低浓度的。对于非常难切的,建议10小时补充酶一次。连续切割2天。
2楼2012-01-03 16:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyongqin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我和你做的是一样的实验,我觉得你的酶切体系太小了,可是适当增大至200ul体系试试。大体系有利于酶切完全。
3楼2012-01-05 10:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyongqin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2012-01-03 16:03:49:
对于基因组DNA酶切,难度稍微大些。一般切不彻底的原因是提取的DNA纯度不够。我的经验是反复苯酚、氯仿抽提多次。
在酶切的时候要注意:看说明书上酶的最适宜的浓度和温度还有适宜的缓冲液浓度。楼主不是用的一种 ...

请问楼主,第二天不加酶时是不是同时也要补加相应量的buffer呢?
4楼2012-01-05 10:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268求调剂 +5 好运连绵不绝 2026-03-12 5/250 2026-03-17 10:12 by Sammy2
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
请填处理意见