24小时热门版块排行榜    

查看: 3251  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

苹果晒太阳

新虫 (小有名气)

[求助] southern blot 的酶切问题

最近在做southern blot ,用CTAB法大量提取水稻DNA,之后用了好几种常见的酶想将其基因组DNA进行酶切,都没法切完全。降低了酶切DNA的量(之前用50μl 体系,DNA量是根据酶的说明书上的浓度换算的,大概5μl左右,5μl酶。现在将DNA量减至1μl),过夜酶切,第二天补酶再切3小时,仍是无法完全酶切。请各位大侠帮忙分析分析。在下感激不尽!

[ Last edited by 苹果晒太阳 on 2012-1-3 at 15:02 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyongqin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
telomerase: 金币+2, 欢迎交流! 2012-03-17 15:50:20
CTAB提取水稻基因组DNA时用的酚仿=25:24:1的溶液分层了吗?你是不是取得下层,而没有混匀了再取?
5楼2012-01-05 10:49:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

qingyuansw20

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+4): 鼓励发帖交流! 2012-01-03 17:32:46
对于基因组DNA酶切,难度稍微大些。一般切不彻底的原因是提取的DNA纯度不够。我的经验是反复苯酚、氯仿抽提多次。
在酶切的时候要注意:看说明书上酶的最适宜的浓度和温度还有适宜的缓冲液浓度。楼主不是用的一种酶吧。原则是温度不同要先进行温度低的进行。浓度不同要先进行低浓度的。对于非常难切的,建议10小时补充酶一次。连续切割2天。
2楼2012-01-03 16:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyongqin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我和你做的是一样的实验,我觉得你的酶切体系太小了,可是适当增大至200ul体系试试。大体系有利于酶切完全。
3楼2012-01-05 10:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyongqin

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2012-01-03 16:03:49:
对于基因组DNA酶切,难度稍微大些。一般切不彻底的原因是提取的DNA纯度不够。我的经验是反复苯酚、氯仿抽提多次。
在酶切的时候要注意:看说明书上酶的最适宜的浓度和温度还有适宜的缓冲液浓度。楼主不是用的一种 ...

请问楼主,第二天不加酶时是不是同时也要补加相应量的buffer呢?
4楼2012-01-05 10:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
请填处理意见