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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重叠PCR问题
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cecilia533

新虫 (小有名气)

[交流] 重叠PCR问题

我用重叠PCR的方法做定点突变 融合了两个基因  长度分别为150 左右和 1500左右  可测序回来以后长的那个基因多了 36个bp  其它位置完全正确  多的又不是两个基因重叠的部分 是短基因的大概引物前面几个活几十个bp的位置。 求大家 帮帮我
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1楼 2011-12-29 14:12:25
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小小的天下

铁虫 (初入文坛)
★
cecilia533(金币+1):谢谢参与
这个问题我也碰到过，可能是模板与引物匹配上的问题，我是重新设计了引物做的，我觉得可以把复性的温度提高试试看
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2楼2012-01-11 11:05:49
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rhguo

铜虫 (小有名气)
★
cecilia533(金币+1):谢谢参与
请教下楼主，150bp的dna好不好回收啊？
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3楼2012-02-20 16:44:37
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
cecilia533(金币+1):谢谢参与
应该是引物的问题，不过该提高的应该是退火温度，150bp想胶回收可能不太好，回收率太低。
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4楼2012-02-20 18:03:13
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cecilia533

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by rhguo at 2012-02-20 16:44:37
请教下楼主，150bp的dna好不好回收啊？

回收应该也是可以的，但我就不做胶回收了，就只做纯化
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5楼2012-05-28 20:14:08
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zhoucd07net

铜虫 (小有名气)
★
cecilia533(金币+1): 谢谢参与
可以 ，胶做厚点
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6楼2012-12-11 13:49:46
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