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重叠PCR问题
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cecilia533
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[交流]
重叠PCR问题
我用重叠PCR的方法做定点突变 融合了两个基因 长度分别为150 左右和 1500左右 可测序回来以后长的那个基因多了 36个bp 其它位置完全正确 多的又不是两个基因重叠的部分 是短基因的大概引物前面几个活几十个bp的位置。 求大家 帮帮我
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cecilia533(金币
+1
):谢谢参与
这个问题我也碰到过,可能是模板与引物匹配上的问题,我是重新设计了引物做的,我觉得可以把复性的温度提高试试看
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2楼
2012-01-11 11:05:49
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rhguo
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cecilia533(金币
+1
):谢谢参与
请教下楼主,150bp的dna好不好回收啊?
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3楼
2012-02-20 16:44:37
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cecilia533(金币
+1
):谢谢参与
应该是引物的问题,不过该提高的应该是退火温度,150bp想胶回收可能不太好,回收率太低。
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4楼
2012-02-20 18:03:13
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cecilia533
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3楼
:
Originally posted by
rhguo
at 2012-02-20 16:44:37
请教下楼主,150bp的dna好不好回收啊?
回收应该也是可以的,但我就不做胶回收了,就只做纯化
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5楼
2012-05-28 20:14:08
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zhoucd07net
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cecilia533(金币+1): 谢谢参与
可以 ,胶做厚点
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6楼
2012-12-11 13:49:46
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