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wapw1987

新虫 (小有名气)

[求助] gst标签蛋白的表达和纯化

有没有高人做过GST标签的蛋白的表达和纯化,能不能给点建议,我用的是pGEX质粒,需要在什么菌株中表达,纯化时用什么方法收集提纯呢?
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

菌株就是BL21,一般没什么问题。诱导表达的话视蛋白不同,达到最大量的时候也不同,建议自己做一下表达量曲线确定最佳时间,我是在诱导6小时后收菌。高压破碎后离心取上清和沉淀进行电泳,确定表达部位后,如果在上清(即可溶性表达),那就以上清上样至GE公司的GST SEPHAROSE 4B的柱子,进行纯化。亲和纯化流速慢一点比较好。
天涯静处无征战,兵气销为日月光。
7楼2011-12-26 13:21:52
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

其实很简单的,就是隔一个小时或者两个小时取1ml菌液,离心得菌体后直接SDSPAGE上样buffer重悬,然后沸水浴5min,取适量上样,看蛋白大小处的条带量就大概知道了,不复杂。
天涯静处无征战,兵气销为日月光。
10楼2011-12-30 09:54:43
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

只是自己参考,所以不用那么精确。
天涯静处无征战,兵气销为日月光。
11楼2011-12-30 09:55:15
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长

24度诱导都是包涵体的话,那就没办法了。说明你的蛋白疏水性很高啊。GST纯化就得要变性溶了再复性了。。。不然你可以换成HIS标签,这样不用复性也能纯化。。。
天涯静处无征战,兵气销为日月光。
15楼2012-04-28 09:45:09
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