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wapw1987

新虫 (小有名气)

[求助] gst标签蛋白的表达和纯化

有没有高人做过GST标签的蛋白的表达和纯化,能不能给点建议,我用的是pGEX质粒,需要在什么菌株中表达,纯化时用什么方法收集提纯呢?
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rhguo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by hwamg at 2011-12-25 01:02:41:
1.        转8ml过夜小摇菌液接入800ml含氨苄的LB培养基(2L锥形瓶), 37度摇菌至OD600至 0.6。
2.        诱导前取1ml菌液,也可使用转入其它质粒的未诱导的BI21菌株作对照。
这是没有诱导的对照,5000rpm,5min去上清,菌体 ...

这是你们实验室用的,包涵体怎么办;lysis buffer 的配方是什么,你们用得载体是什么
13楼2012-04-27 17:01:52
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rhguo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 落明逐暗 at 2011-12-26 13:21:52:
菌株就是BL21,一般没什么问题。诱导表达的话视蛋白不同,达到最大量的时候也不同,建议自己做一下表达量曲线确定最佳时间,我是在诱导6小时后收菌。高压破碎后离心取上清和沉淀进行电泳,确定表达部位后,如果在 ...

包涵体怎么办呢?37诱导,我24度诱导都大部分是在包涵体里面的,不知道怎么办,只能先尿素溶解再透析,再复性了;你们有什么好办法吗?
14楼2012-04-27 17:07:45
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