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新手提RNA，请教几个问题
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小鼠脾细胞，用试剂盒提的RNA，提了两次结果都差不多，所有器皿我都已经处理过了，这是降解的很严重吗？ 1，整个提取过程需要在冰上进行吗？试剂盒说明书上并没有明确提到 2. 整个操作过程大概保证在多长时间内完成？因为第一次提，过程很不熟练，我觉得整个操作有点慢 3. 如何能避免基因组DNA污染？第一步裂解细胞试剂盒protocol写充分震荡，怎么掌握强度？过于剧烈会不会造成基因组DNA断裂？  |
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 实验技术 | 【分子生物】EPI帖 |
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heroyl
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
ln031101(金币+3): 谢谢！ 2011-12-19 21:56:25
ln031101(金币+3): 谢谢！ 2011-12-19 21:56:25
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我觉得吧，电泳图不一定就能反映真实情况，因为难免你在电泳的时候会不会出现什么问题，这也是很重要的。以前我提RNA后跑电泳，效果经常不是很好，可作RT还是没问题的。 我也经常提动物组织的RNA，一般都是用Trizol提的，组织都是以前冻存的，各个组织都提过，如果提的组织多的话可能要2-3小时，用nanodrop测浓度或260/280都挺好的，做RT-PCR也没问题。 操作还是要小心的，专用的管子、枪头、匀浆机的转子都是泡过的，提的时候口罩、手套伺候，手套勤换，多喷酒精等等，需要注意的很多。 祝实验顺利。 |
9楼2011-12-19 17:16:49
starseacow
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2楼2011-12-18 04:36:03
shaquila
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