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新手提RNA，请教几个问题
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小鼠脾细胞，用试剂盒提的RNA，提了两次结果都差不多，所有器皿我都已经处理过了，这是降解的很严重吗？ 1，整个提取过程需要在冰上进行吗？试剂盒说明书上并没有明确提到 2. 整个操作过程大概保证在多长时间内完成？因为第一次提，过程很不熟练，我觉得整个操作有点慢 3. 如何能避免基因组DNA污染？第一步裂解细胞试剂盒protocol写充分震荡，怎么掌握强度？过于剧烈会不会造成基因组DNA断裂？  |
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 实验技术 | 【分子生物】EPI帖 |
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wanghd2826
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【答案】应助回帖
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ln031101(金币+5): 太感谢了！ 2011-12-19 21:55:59
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ln031101(金币+5): 太感谢了！ 2011-12-19 21:55:59
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总体来说，效果不佳（不过你第一次提能得到这样的效果已经很不错了），最后两条泳道的用DNA酶处理下还能做一般的RT-PCR，以下是我提RNA的建议和一点经验： 1、整个过程尽量在冰上进行。 2、最好用规划过的枪头和离心管，不是很贵。如果为了省钱，那得用0.1%的DEPC水过夜处理，再高压灭菌，因为DEPC非常危险，所以这点钱最好别省。 3、速度尽量快，但不要心急，因为无论怎样RNA都会降解。 4、研磨是关键，最好用液氮，研磨到细粉状。 5、点样孔很亮，说明有蛋白质污染，可能是在取上清的过程中吸多了，不要贪多，够用即可。 |
7楼2011-12-19 15:57:42
starseacow
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2楼2011-12-18 04:36:03
shaquila
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