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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药剂学 » HPLC保留时间规律前移
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juanjiang

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC保留时间规律前移

我的样品是氟尿嘧啶的透皮样品，采用的流动性是重蒸水（USP药典条件），C18柱，流速为1mi/min，柱温为40℃，进标准品的时候峰型很好，保留时间也较稳定。但是进透皮样品后，峰型变差，而且保留时间规律迁移（每个样品往前移动0.02左右），一天下来可从5分多钟移动到3分钟。网上说可能是柱子没有平衡好，但我每次都平衡很长时间，基线都很平，进样后就不太平了。为了避免前后两个样品之间的影响，每个样品我都采集了双倍的时间。请教高手指出是什么原因造成保留时间规律前移？怎么解决？
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1楼2011-12-16 16:13:27
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥(金币+1): 楼主的流动相是重蒸水的说~~~~ 2011-12-16 17:16:57
juanjiang: 金币+1 2012-05-08 15:08:09
流动相组分变化，譬如有机相蒸发。使流动相极性、pH逐渐发生变化，进而保留时间递变。
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守候在风中的宁静。
2楼2011-12-16 16:51:59
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dacailiao

铁杆木虫 (小有名气)
★
xiaoxiao270(金币+1): 谢谢 2011-12-16 21:24:05
是不是因为C18柱对纯水的耐用性不好？
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3楼2011-12-16 20:43:43
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caohouping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥(金币+1): 感谢应助 2011-12-17 09:45:50
juanjiang: 金币+1 2012-05-08 15:07:56
C18柱对纯水的耐用性不好，导致柱效下降 ，从而保留时间不断前移，而且峰型也变差，应购买耐100%水的C18柱才行
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4楼2011-12-17 08:34:46
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ai532521720

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥(金币+1): 感谢应助 2011-12-17 09:46:02
我觉得是进气泡了，以前我也遇过这样的问题，要不你排一下气试试
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5楼2011-12-17 09:27:11
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juanjiang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2011-12-16 16:51:59:
流动相组分变化，譬如有机相蒸发。使流动相极性、pH逐渐发生变化，进而保留时间递变。

不应该存在这个问题的，我用的流动相是脱气重蒸水，没有有机相
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6楼2011-12-17 09:32:45
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juanjiang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by ai532521720 at 2011-12-17 09:27:11:
我觉得是进气泡了，以前我也遇过这样的问题，要不你排一下气试试

没有气泡，我排了很久，而且柱压也很稳定。如果有气泡的话，在柱压上应该会表现出来的，我的柱压一直是99
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7楼2011-12-17 09:34:49
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juanjiang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by caohouping at 2011-12-17 08:34:46:
C18柱对纯水的耐用性不好，导致柱效下降 ，从而保留时间不断前移，而且峰型也变差，应购买耐100%水的C18柱才行

如果用新的C18柱可以解决这个问题不？我用这个条件的时间不会很长。而且，后来我又连续进了一个标准样品多次，发现保留时间又回到最初的五分多钟，但是每进一次，保留时间又开始规律性的往后移了......这也是柱子的问题？
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8楼2011-12-17 09:38:40
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caohouping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
豆哥(金币+1): 感谢应助 2011-12-17 09:46:16
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-05-08 16:46:14
是直接就进了标准样多次，还是经过甲醇冲洗以后才进的
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9楼2011-12-17 09:42:57
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥(金币+1): 有道理~~~ 2011-12-17 10:05:52
juanjiang: 金币+2 2012-05-08 15:08:27
楼主用的C18柱应该是普通的C18柱。因为你的流动相是纯水，而C18链是疏水性的，因此遇到水之后会由于疏水斥力而导致C18链的倾覆，而且这个倾覆是不可逆的，这样就会产生像楼主所说的保留时间原来越提前的现象，这等于是一种变相的固定相的流失，从而导致保留能力愈来愈弱，进而出现保留时间提前的现象。我建议楼主购买亲水相的色谱柱，其实就是在硅胶与C18链键合键之间加入了极性的亲水基团，在使用纯水相的时候，这个亲水基团和水产生作用力而保护C18链不受疏水的斥力影响从而产生稳定的色谱行为。楼主还有什么疑问多和大家交流沟通吧。
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心似白云常自在，意如流水任东西。
10楼2011-12-17 10:03:22
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