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lwcy1000

铁虫 (初入文坛)

[求助] IPTG诱导表达出现两条带，并离的很近，什么原因啊？

BL21菌株 IPTG诱导后，经高压破碎，镍柱纯化后，出现两条带，并离的很近，什么原因啊？
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1楼2011-12-11 22:00:28
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liubowhict

金虫 (小有名气)
我表达的和你说的情况很多，我分离了去做maldi-tof MS发现是同一物质，所以我感觉是同一蛋白的不同状态的迁移能力不一样
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6楼2012-02-27 09:53:28
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是两种物质，也可能是在处理过程中同一物质降解成两种物质！
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dasheng1980
3楼2011-12-30 13:15:43
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vszhang

金虫 (正式写手)
我感觉是同一蛋白的不同状态的迁移能力不一样

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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启蒙的恩师是‘神拳泰斗’刘虎刘老爷子，然后是‘无敌刀’杨斌杨二爷子、‘一枪刺九龙’赵广赵老师、‘神刀铁胳臂’胡得杨胡大爷
4楼2011-12-30 14:58:24
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab(金币+7, MicEPI+1): 高手，这些原因都是需要实践才能总结的出来的啊。 2011-12-31 00:56:01
首先，你要确定是诱导出来的带
在这个前提下，你可以先用你的目标蛋白的抗体检测一下，如果两条带都有信号，则有可能是降解（如果你的目标条带是滞后带）或者是蛋白质复合物（如果你的目标条带是前面的那个带）
如果是降解，那么有可能你的目标条带有特异性的降解，如果你做了几次都是这样的话。那么恭喜你，你应该马上去挖胶测序，看看是不是有特定的剪切位点，或者，保守一些，用其它的表达系统试试
如果是第二种，同样恭喜你，虽然是走SDS-PAGE，有的时候也是有这样的运气的，比如分子内的共价键结合；建议加大DTT的浓度试试

还有一种情况，你的蛋白引起了大肠杆菌或者说你的表达宿主中的某个蛋白质的超量表达，这也将是一个很有意思的问题。

祝你好运！
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致良知
5楼2011-12-30 23:11:53
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