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athenawj

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1335558

[交流] western 结果220KD 蛋白还好， actin竟然让我凌乱了

30mA转膜过夜,大蛋白都有，actin竟然杂不出来，图也很诡异。难道是转透了？另外，我在转膜缓冲液里加了SDS，是不是有影响到actin?

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1楼 2011-12-06 20:08:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

引用回帖:

5楼: Originally posted by apple6299 at 2011-12-06 21:58:28:
是不是转过头了呀过夜太久了吧 actin只有43KD的样子喔我记得那时自己做的条件是40mA转40-50min，封闭过夜，杂交效果还是蛮好的单一的条带，挺漂亮。 GAPDH的就没那么好弄

20-30mA 4度转膜过夜是很常用的，尤其是高分子量蛋白，LZ都说了要检测220kd的，所以这种做法很正确。相反，你所说的40mA砖40min还真是少见。。。那么短的时间电流还那么小，分子量稍微大点的蛋白都转不过去吧